بی ایس پی کیو آئی
BspQI کا اظہار E. coli میں دوبارہ کیا جا سکتا ہے جو مخصوص سائٹوں کو پہچان سکتا ہے اور اس کے تحت تیار کیا جاتا ہے۔
BspQI، ایک IIs پابندی endonuclease پابندی endonuclease، ایک ریکومبیننٹ E. کولی سٹرین سے ماخوذ ہے جو Bacillus sphaericus سے کلون اور ترمیم شدہ BspQI جین کو لے جاتا ہے۔یہ مخصوص سائٹس کو پہچان سکتا ہے، اور شناخت کی ترتیب اور کلیویج سائٹس مندرجہ ذیل ہیں:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
مصنوعات کی خصوصیات
1. اعلی سرگرمی، تیز عمل انہضام؛
2. کم ستارے کی سرگرمی، درست کٹنگ کو یقینی بنانا جیسے "سکیلپل"؛
3. بغیر BSA اور جانوروں کی اصل مفت؛
میتھیلیشن حساسیت
Dمیں میتھیلیشن:حساس نہیں؛
Dسینٹی میٹر میتھیلیشن:حساس نہیں؛
سی پی جی میتھیلیشن:حساس نہیں؛
ذخیرہ کرنے کے حالات
مصنوعات کو بھیج دیا جانا چاہئے ≤ 0℃؛-25~- 15℃ حالت میں اسٹور کریں۔
اسٹوریج بفر
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X-100 اور 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C)۔
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ کو 50 µL کے کل رد عمل والیوم میں 50°C پر 1 گھنٹہ میں 1µg اندرونی کنٹرول DNA کو ہضم کرنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا جاتا ہے۔
کوالٹی کنٹرول
پروٹین پیوریٹی پرکھ (SDS-PAGE):BspQI کی پاکیزگی کا تعین ≥95% SDS-PAGE تجزیہ کے ذریعے کیا گیا تھا۔
RNase:BspQI کا 10U 1.6μg MS2 RNA کے ساتھ 50℃ پر 4 گھنٹے تک کوئی انحطاط پیدا نہیں کرتا جیسا کہ ایگرز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے طے کیا جاتا ہے۔
غیر مخصوص DNase سرگرمی:BspQI کا 10U 1μg λ DNA کے ساتھ 50℃ پر 16 گھنٹے کے لیے، 1hour کے لیے 50℃ کے مقابلے میں، کوئی اضافی DNA نہیں دیتا جیسا کہ ایگرز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے طے کیا گیا ہے۔
لگانا اور دوبارہ کرنا:10U BspQI کے ساتھ 1 μg λDNA کے ہضم ہونے کے بعد، DNA کے ٹکڑوں کو T4 DNA ligase کے ساتھ 16ºC پر باندھا جا سکتا ہے۔اور یہ بند شدہ ٹکڑوں کو BspQI کے ساتھ دوبارہ کاٹا جا سکتا ہے۔
ای کولی ڈی این اے: E. coli 16s rDNA- مخصوص TaqMan qPCR کا پتہ لگانے سے پتہ چلتا ہے کہ E.coli جینوم کی باقیات ≤ 0.1pg/ul۔
میزبان پروٹین کی باقیات:≤ 50 پی پی ایم
بیکٹیریل اینڈوٹوکسین: LAL-ٹیسٹ، چینی فارماکوپیا IV 2020 ایڈیشن کے مطابق، جیل کی حد ٹیسٹ کا طریقہ، عام اصول (1143)۔بیکٹیریل اینڈوٹوکسن کا مواد ≤10 EU/mg ہونا چاہیے۔
رد عمل کا نظام اور حالات
| جزو | حجم |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| ڈی این اے | 1 μg |
| 10 ایکس BspQ I بفر | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL تک |
رد عمل کی شرائط: 50℃, 1 ~ 16 ح
حرارت کو غیر فعال کرنا: 20 منٹ کے لئے 80 ° C۔
تجویز کردہ رد عمل کا نظام اور حالات نسبتاً اچھا انزائم ہاضمہ اثر فراہم کر سکتے ہیں، جو صرف حوالہ کے لیے ہے، براہ کرم تفصیلات کے لیے تجرباتی نتائج سے رجوع کریں۔
مصنوعات کی درخواست
پابندی endonuclease عمل انہضام، تیزی سے کلوننگ.
نوٹس
1. انزائم کا حجم ≤ رد عمل کے حجم کا 1/10۔
2. ستارے کی سرگرمی اس وقت ہو سکتی ہے جب گلیسرول کا ارتکاز 5% سے زیادہ ہو۔
3. کلیویج کی سرگرمی اس وقت ہو سکتی ہے جب سبسٹریٹ تجویز کردہ تناسب سے نیچے ہو۔
