پروٹینیز K (لائفلائزڈ پاؤڈر)
بلی نمبر: HC4500A
پروٹیناز K ایک مستحکم سیرین پروٹیز ہے جس میں وسیع سبسٹریٹ مخصوصیت ہے۔یہ ڈٹرجنٹ کی موجودگی میں بھی مقامی حالت میں بہت سے پروٹین کو خراب کر دیتا ہے۔کرسٹل اور مالیکیولر اسٹرکچر اسٹڈیز کے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ انزائم کا تعلق سبٹیلیسن فیملی سے ہے جس میں ایک فعال سائٹ کیٹلیٹک ٹرائیڈ (Asp39-اس کا69--.سر n224)۔کلیویج کی بنیادی جگہ پیپٹائڈ بانڈ ہے جو الیفاٹک اور آرومیٹک امینو ایسڈ کے کاربوکسائل گروپ سے ملحق ہے جس میں بلاک شدہ الفا امینو گروپس ہیں۔یہ عام طور پر اس کے وسیع کے لیے استعمال ہوتا ہے۔خاصیت
ذخیرہ کرنے کی شرائط
2-8℃ قلیل مدتی اسٹوریج، -25~-15℃ طویل مدتی اسٹوریج۔خشک پاؤڈر کی حیثیت -25~-15℃ 3 سال کے لیے درست ہے۔انزائم پاؤڈر کو مناسب حجم میں تحلیل کیا جانا چاہئے۔
تفصیلات
| ظہور | سفید سے آف وائٹ بے ترتیب لائو فلائز پاؤڈر |
| سرگرمی | ≥30 U/mg |
| ڈی نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
| آر نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
پراپرٹیز
| ای سی نمبر | 3.4.21.64 (Tritirachium البم سے ریکومبیننٹ) |
| سالماتی وزن | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| آئیسو الیکٹرک پوائنٹ | 7.81 |
| بہترین پی ایچ | 7.0-12.0 تصویر 1 |
| زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت | 65 ℃ تصویر 2 |
| پی ایچ استحکام | پی ایچ 4.5-12.5 (25℃، 16h) تصویر 3 |
| تھرمل استحکام | 50℃ سے نیچے (pH 8.0, 30min) تصویر 4 |
| ایکٹیوٹرز | ایس ڈی ایس، یوریا |
| روکنے والے | ڈائیسوپروپل فلورو فاسفیٹ؛phenylmethylsulfonyl فلورائڈ |
درخواستیں
1. جینیاتی تشخیصی کٹ
2. آر این اے اور ڈی این اے نکالنے کی کٹس
3. ٹشوز سے غیر پروٹین اجزاء کا اخراج، پروٹین کی نجاستوں کا انحطاط، جیسے ڈی این اے ویکسین اور ہیپرین کی تیاری
4. pulsed electrophoresis کے ذریعے کروموسوم DNA کی تیاری
5. مغربی دھبہ
6. وٹرو تشخیص میں انزیمیٹک گلائکوسلیٹڈ البومن ری ایجنٹس
احتیاطی تدابیر
استعمال کرتے وقت یا وزن کرتے وقت حفاظتی دستانے اور چشمیں پہنیں، اور استعمال کے بعد اچھی طرح ہوادار رکھیں۔یہ پروڈکٹ جلد کی الرجک ردعمل اور آنکھوں میں شدید جلن کا سبب بن سکتی ہے۔اگر سانس لیا جائے تو یہ الرجی یا دمہ کی علامات یا ڈسپنیا کا سبب بن سکتا ہے۔سانس کی جلن کا سبب بن سکتا ہے۔
پرکھ
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ (U) کو درج ذیل شرائط کے تحت 1 μmol ٹائروسین فی منٹ بنانے کے لیے کیسین کو ہائیڈولائز کرنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔
ری ایجنٹس کی تیاری
ریجنٹ I: 1 گرام دودھ کیسین کو 0.1M سوڈیم فاسفیٹ محلول (pH 8.0) کے 50ml میں تحلیل کیا گیا، 65-70 ℃ پانی میں 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، ہلایا اور تحلیل کیا گیا، پانی سے ٹھنڈا کیا گیا، سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے ذریعے pH 8.0 کے حجم میں ایڈجسٹ کیا گیا۔ 100 ملی لیٹر
ریجنٹ II: 0.1M ٹرائکلورواسیٹک ایسڈ، 0.2M سوڈیم ایسیٹیٹ، 0.3M ایسیٹک ایسڈ۔
ریجنٹ III: 0.4M Na2CO3حل
ریجنٹ IV: فورینٹ ریجنٹ کو 5 بار خالص پانی سے ملایا جاتا ہے۔
ریجنٹ V: انزائم ڈیلوئنٹ: 0.1M سوڈیم فاسفیٹ محلول (pH 8.0)۔
ریجنٹ VI: ٹائروسین محلول: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine 0.2M HCL کے ساتھ تحلیل۔
طریقہ کار
1. ریجنٹ I کا 0.5 ملی لیٹر پہلے سے 37 ℃ پر گرم کیا جاتا ہے، 0.5 ملی لیٹر انزائم محلول شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں، اور 37 ℃ پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
2. رد عمل کو روکنے کے لیے 1 ملی لیٹر ریجنٹ II شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں، اور 30 منٹ تک انکیوبیشن جاری رکھیں۔
3. Centrifugate رد عمل کا حل.
4. 0.5 ملی لیٹر سپرناٹینٹ لیں، 2.5 ملی لیٹر ریجنٹ III، 0.5 ملی لیٹر ریجنٹ IV شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں اور 37 ℃ پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
5. او ڈی660OD کے طور پر طے کیا گیا تھا۔1;خالی کنٹرول گروپ: 0.5 ملی لیٹر ریجنٹ V کو OD کا تعین کرنے کے لیے انزائم حل کو تبدیل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔660OD کے طور پر2، ΔOD=OD1-OD2.
6. L-ٹائروسین معیاری وکر: 0.5mL مختلف ارتکاز L ٹائروسین محلول، 2.5mL ریجنٹ III، 0.5mL ریجنٹ IV 5mL سینٹری فیوج ٹیوب میں، 37℃ میں 30 منٹ تک انکیوبیٹ کریں، OD کا پتہ لگائیں۔660L-tyrosine کے مختلف ارتکاز کے لیے، پھر معیاری وکر Y=kX+b حاصل کیا، جہاں Y L-tyrosine کا ارتکاز ہے، X OD ہے600.
حساب کتاب
2: رد عمل کے حل کا کل حجم (mL)
0.5: انزائم محلول کا حجم (mL)
0.5: کروموجینک تعیین (mL) میں استعمال ہونے والے رد عمل کا مائع حجم
10: رد عمل کا وقت (منٹ)
Df: dilution ایک سے زیادہ
C: انزائم کا ارتکاز (mg/mL)
حوالہ جات
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972)؛ 23:77۔
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.بائیوفیس۔Res.کمیون(1971)؛ 44:513۔
3. ہلز، ایچ.ET رحمہ اللہ تعالی.،یورجے بائیو کیم۔(1975)؛ 56:103-108۔
4. سمبروک جےet al. مالیکیولر کلوننگ: ایک لیبارٹری دستی، دوسرا ایڈیشن، کولڈ اسپرنگ ہاربرلیبارٹری پریس، کولڈ اسپرنگ ہاربر (1989)۔
تصویر 2 بہترین درجہ حرارت
20 ایم ایم کے فاسفیٹ بفر پی ایچ 8.0 میں رد عمل۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 3 پی ایچ استحکام
25℃، 50mM بفر حل کے ساتھ 16h-علاج: pH 4.5-5.5، Acetate;پی ایچ 6.0-8.0، نا فاسفیٹ؛pH 8.0-9.0، Tris-ایچ سی ایلpH 9.0-12.5، Glycine-NaOH۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 4 تھرمل استحکام
50mM Tris-HCL بفر، pH 8.0 کے ساتھ 30 منٹ کا علاج۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 5 اسٹوریج استحکامty at 25℃
