پروٹینیز کے این جی ایس (پاؤڈر)
بلی نمبر: HC4507A
NGS Protease K ایک مستحکم سیرین پروٹیز ہے جس میں اعلی انزائم سرگرمی اور وسیع سبسٹریٹ کی خصوصیت ہے۔ یہ انزائم ترجیحی طور پر ہائیڈرو فوبک امینو ایسڈز، سلفر پر مشتمل امینو ایسڈز اور خوشبودار امینو ایسڈز کے C-ٹرمینل سے ملحق ایسٹر بانڈز اور پیپٹائڈ بانڈز کو گل جاتا ہے۔لہذا، یہ اکثر مختصر پیپٹائڈس میں پروٹین کو کم کرنے کے لئے استعمال کیا جاتا ہے.NGS Protease K Asp کے ساتھ ایک عام سیرین پروٹیز ہے۔39-اس کا69-سر224کیٹلیٹک ٹرائیڈ جو سیرین پروٹیز کے لیے منفرد ہے، اور کیٹلیٹک سینٹر ٹو Ca سے گھرا ہوا ہے۔2+استحکام کے لیے بائنڈنگ سائٹس، حالات کی ایک وسیع رینج کے تحت اعلی انزائم سرگرمی کو برقرار رکھنا۔
تفصیلات
| ظہور | سفید سے آف وائٹ بے رنگ پاؤڈر، لائوفائلائزڈ |
| مخصوص سرگرمی | ≥40U/mg ٹھوس |
| ڈی نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
| آر نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
| بائیو برڈن | ≤50CFU/g ٹھوس |
| نیوکلک ایسڈ کی باقیات | <5pg/mg ٹھوس |
پراپرٹیز
| ذریعہ | Tritirachium البم |
| ای سی نمبر | 3.4.21.64(Tritirachium البم سے ریکومبیننٹ) |
| سالماتی وزن | 29kDa (SDS-PAGE) |
| آئیسو الیکٹرک پوائنٹ | 7.81 تصویر 1 |
| بہترین پی ایچ | 7.0-12.0 (تمام اعلی سرگرمی انجام دیتے ہیں) تصویر 2 |
| زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت | 65℃ تصویر 3 |
| پی ایچ استحکام | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) تصویر 4 |
| تھرمل استحکام | 50℃ سے نیچے (pH 8.0, 30min) تصویر 5 |
| اسٹوریج استحکام | 12 ماہ کے لیے 25 ℃ پر ذخیرہ تصویر 6 |
| ایکٹیوٹرز | ایس ڈی ایس، یوریا |
| روکنے والے | ڈائیسوپروپل فلورو فاسفیٹ؛بینزائل سلفونائل فلورائیڈ |
ذخیرہ کرنے کی شرائط
لائو فلائزڈ پاؤڈر کو -25~-15 ℃ پر روشنی سے زیادہ دیر تک محفوظ رکھیں۔تحلیل کے بعد، روشنی سے دور 2-8℃ پر قلیل مدتی سٹوریج کے لیے مناسب حجم میں ایلی کوٹ یا روشنی سے دور -25~-15℃ پر طویل مدتی اسٹوریج۔
احتیاطی تدابیر
استعمال کرتے وقت یا وزن کرتے وقت حفاظتی دستانے اور چشمیں پہنیں، اور استعمال کے بعد اچھی طرح ہوادار رکھیں۔یہ پروڈکٹ جلد کی الرجک ردعمل اور آنکھوں میں شدید جلن کا سبب بن سکتی ہے۔اگر سانس لیا جائے تو یہ الرجی یا دمہ کی علامات یا ڈسپنیا کا سبب بن سکتا ہے۔سانس کی جلن کا سبب بن سکتا ہے۔
یونٹ کی تعریف
NGS Protease K کی ایک اکائی کو معیاری تعین کی شرائط کے تحت 1 μmol L-tyrosine میں کیسین کو ہائیڈولائز کرنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔
ری ایجنٹس کی تیاری
| ریجنٹ | کارخانہ دار | تفصیلی فہر ست |
| کیسین تکنیکیگائے کے دودھ سے | سگما ایلڈرچ | C7078 |
| NaOH | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trichloroacetic ایسڈ | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| سوڈیم ایسیٹیٹ | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| ایسیٹک ایسڈ | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| ایچ سی ایل | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| سوڈیم کاربونیٹ | سائنو فارم کیمیکلReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| فولین-فینول | سنگون بائیوٹیک (شنگھائی)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| ایل ٹائروسین | سگما | 93829 |
ریجنٹ I:
سبسٹریٹ: بوائین دودھ کے محلول سے 1% کیسین: 0.1M سوڈیم فاسفیٹ محلول، pH 8.0 کے 50ml میں 1g بوائین دودھ کیسین کو تحلیل کریں، پانی کے غسل میں 65-70 °C پر 15 منٹ کے لیے گرم کریں، ہلائیں اور تحلیل کریں، پانی سے ٹھنڈا کریں، ایڈجسٹ کریں۔ سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ کو پی ایچ 8.0، اور 100 ملی لیٹر تک پتلا کریں۔
ریجنٹ II:
TCA محلول: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate اور 0.3M acetic acid (وزن 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid یکے بعد دیگرے، 50mL deionized پانی شامل کریں، HC40 کے ساتھ pH30 میں ایڈجسٹ کریں 100 ملی لیٹر)۔
ریجنٹ III:
0.4m سوڈیم کاربونیٹ محلول (4.24 گرام اینہائیڈروس سوڈیم کاربونیٹ کا وزن اور 100 ملی لیٹر پانی میں گھل جاتا ہے)
ریجنٹ IV:
فولن فینول ری ایجنٹ: ڈیونائزڈ پانی سے 5 بار پتلا کریں۔
ریجنٹ V:
انزائم ڈیلوئنٹ: 0.1 ایم سوڈیم فاسفیٹ محلول، پی ایچ 8.0۔
ریجنٹ VI:
L-tyrosine معیاری حل: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl کے ساتھ تحلیل۔
طریقہ کار
1. UV-Vis spectrophotometer کو آن کریں اور فوٹو میٹرک پیمائش کو منتخب کریں۔
2. طول موج کو 660nm کے طور پر سیٹ کریں۔
3. پانی کے غسل کو آن کریں، درجہ حرارت 37 ℃ پر سیٹ کریں، 3-5 منٹ تک درجہ حرارت میں کوئی تبدیلی نہ ہونے کو یقینی بنائیں۔
4. 0.5mL سبسٹریٹ کو 2mL سینٹری فیوج ٹیوب میں 37℃ پانی کے غسل میں 10 منٹ کے لیے پہلے سے گرم کریں۔
5. 10 منٹ کے لیے پہلے سے گرم سنٹری فیوج ٹیوب میں 0.5mL پتلا ہوا انزائم محلول نکالیں۔خالی گروپ کے طور پر انزائم diluent مقرر کریں.
6. رد عمل کے فوراً بعد 1.0 ملی لیٹر TCA ریجنٹ شامل کریں۔اچھی طرح مکس کریں اور پانی کے غسل میں 30 منٹ تک سینکیں۔
7. Centrifugate رد عمل کا حل.
8. درج ذیل اجزاء کو مخصوص ترتیب میں شامل کریں۔
| ریجنٹ | حجم |
| سپرنٹنٹ | 0.5 ملی لیٹر |
| 0.4M سوڈیم کاربونیٹ | 2.5 ملی لیٹر |
| فولن فینول ری ایجنٹ | 0.5 ملی لیٹر |
9. پانی کے غسل میں 37 ℃ میں 30 منٹ تک سینکنے سے پہلے اچھی طرح مکس کریں۔
10. OD660OD کے طور پر طے کیا گیا تھا۔1;خالی کنٹرول گروپ: انزائم ڈیلوئنٹ کو OD کا تعین کرنے کے لیے انزائم سلوشن کو تبدیل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔660OD کے طور پر2، ΔOD=OD1-OD2.
11. L-tyrosine معیاری منحنی خطوط: 0.5mL مختلف ارتکاز L-tyrosine محلول، 2.5mL 0.4M سوڈیم کاربونیٹ، 5mL سینٹری فیوج ٹیوب میں 0.5mL فولن فینول ریجنٹ، 30 منٹ کے لیے 37℃ میں انکیوبیٹ کریں، OD کا پتہ لگائیں۔660L-tyrosine کے مختلف ارتکاز کے لیے، پھر معیاری وکر Y=kX+b حاصل کیا، جہاں Y L-tyrosine کا ارتکاز ہے، X OD ہے600.
حساب کتاب
2: رد عمل کے حل کا کل حجم (mL)
0.5: انزائم محلول کا حجم (mL)
0.5: کروموجینک تعیین (mL) میں استعمال ہونے والے رد عمل کا مائع حجم
10: رد عمل کا وقت (منٹ)
Df: dilution ایک سے زیادہ
C: انزائم کا ارتکاز (mg/mL)
اعداد و شمار
تصویر 1 ڈی این اے کی باقیات
| نمونہ | Ave C4 | نیوکلک ایسڈ بازیابی (pg/mg) | بازیابی (%) | ٹوٹل نیوکلک تیزاب ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA سے پاک H2O | غیر متعین | - | - | - |
تصویر 2 بہترین پی ایچ
تصویر 3 بہترین درجہ حرارت
تصویر 4 پی ایچ استحکام
تصویر 5 تھرمل استحکام
تصویر 6. 25℃ پر سٹوریج کا استحکام
