ماؤس جین ٹائپنگ کٹ

بلی نمبر: HCR2021A

یہ پروڈکٹ ایک کٹ ہے جو ماؤس جینی ٹائپس کی تیزی سے شناخت کے لیے بنائی گئی ہے، بشمول ڈی این اے کروڈ نکالنے اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن سسٹم۔پروڈکٹ کو پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے لیے براہ راست ماؤس ٹیل، کان، پیر اور دیگر ٹشوز سے لیسس بفر اور پروٹینیز کے ذریعے سادہ کلیویج کے بعد استعمال کیا جا سکتا ہے۔راتوں رات ہاضمہ نہیں، فینول-کلوروفارم نکالنا یا کالم صاف کرنا، جو آسان ہے اور تجربات کے وقت کو کم کرتا ہے۔پروڈکٹ 2kb تک ہدف کے ٹکڑوں کو بڑھاوا دینے اور 3 جوڑوں تک پرائمر کے ساتھ ملٹی پلیکس PCR ری ایکشن کے لیے موزوں ہے۔2×ماؤس ٹشو ڈائریکٹ پی سی آر مکس میں جینیاتی طور پر انجینئرڈ ڈی این اے پولیمریز، ایم جی ہوتا ہے۔²⁺, dNTPs اور ایک بہتر بفر سسٹم جو کہ اعلی امپلیفیکیشن کی کارکردگی اور روکنے والے رواداری فراہم کرتا ہے، تاکہ PCR کے رد عمل کو ٹیمپلیٹ اور پرائمر شامل کرکے اور مصنوعات کو 1× تک ری ہائیڈریٹ کرکے انجام دیا جاسکے۔اس پروڈکٹ کے ساتھ بڑھا ہوا PCR پروڈکٹ 3′ آخر میں ایک نمایاں "A" بیس رکھتا ہے اور اسے صاف کرنے کے بعد TA کلوننگ کے لیے براہ راست استعمال کیا جا سکتا ہے۔

اجزاء

ذخیرہ کرنے کی شرائط

مصنوعات کو 2 سال کے لیے -25~-15℃ پر اسٹور کیا جانا چاہیے۔پگھلنے کے بعد، Lysis بفر کو 2~8℃ پر قلیل مدتی متعدد استعمال کے لیے ذخیرہ کیا جا سکتا ہے، اور استعمال کرتے وقت اچھی طرح مکس کیا جا سکتا ہے۔

درخواست

یہ پروڈکٹ ماؤس ناک آؤٹ تجزیہ، ٹرانسجینک کا پتہ لگانے، جین ٹائپنگ اور اسی طرح کے لیے موزوں ہے۔

خصوصیات

1۔سادہ آپریشن: جینومک ڈی این اے نکالنے کی ضرورت نہیں؛

2.وسیع ایپلی کیشن: مختلف ماؤس ٹشوز کی براہ راست پرورش کے لیے موزوں۔

ہدایات

1۔جینومک ڈی این اے کی رہائی

1) lysate کی تیاری

ٹشو لیسیٹ ماؤس کے نمونوں کی تعداد کے مطابق تیار کیا جاتا ہے جو لیس کیے جانے ہیں (ٹیشو لیسیٹ کو خوراک کے مطابق سائٹ پر تیار کیا جانا چاہئے اور استعمال کے لئے اچھی طرح سے ملایا جانا چاہئے)، اور ایک نمونے کے لئے درکار ریجنٹس کا تناسب درج ذیل ہے:

2) نمونہ کی تیاری اور Lysis

تجویز کردہ ٹشو استعمال

صاف سینٹری فیوج ٹیوبوں میں مناسب مقدار میں ماؤس ٹشو کے نمونے لیں، ہر سینٹری فیوج ٹیوب میں 200μL تازہ ٹشو لائسیٹ شامل کریں، ورٹیکس کریں اور شیک کریں، پھر 30 منٹ کے لیے 55 ℃ پر انکیوبیٹ کریں، اور پھر 3 منٹ کے لیے 98 ℃ پر گرم کریں۔

3) سینٹرفیوگریشن

لائسیٹ کو اچھی طرح ہلائیں اور 12,000 rpm پر 5 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں۔سپرنٹنٹ کو پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے سانچے کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔اگر سٹوریج کے لیے ٹیمپلیٹ کی ضرورت ہو تو، سپرنٹنٹ کو ایک اور جراثیم سے پاک سینٹری فیوج ٹیوب میں منتقل کریں اور 2 ہفتوں کے لیے -20℃ پر اسٹور کریں۔

2.پی سی آر ایمپلیفیکیشن

2×ماؤس ٹشو ڈائریکٹ پی سی آر مکس کو -20℃ سے ہٹائیں اور برف پر پگھلائیں، الٹا مکس کریں اور PCR ری ایکشن سسٹم کو درج ذیل ٹیبل کے مطابق تیار کریں (برف پر چلائیں):

نوٹ:

a) شامل کردہ رقم سسٹم کے 1/10 سے زیادہ نہیں ہونی چاہئے، اور اگر بہت زیادہ اضافہ کیا جائے تو پی سی آر ایمپلیفیکیشن کو روکا جا سکتا ہے۔

پی سی آر کی تجویز کردہ شرائط

نوٹ:

a) اینیلنگ درجہ حرارت: پرائمر کی Tm قدر کے حوالے سے، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ اینیلنگ درجہ حرارت کو پرائمر کی چھوٹی Tm قدر +3~5℃ پر سیٹ کریں۔

عام مسائل اور حل

1۔کوئی ٹارگٹڈ سٹرپس نہیں۔

1) ضرورت سے زیادہ lysis مصنوعات.ٹیمپلیٹ کی سب سے مناسب مقدار کا انتخاب کریں، عام طور پر سسٹم کے 1/10 سے زیادہ نہیں؛

2) نمونے کا بہت بڑا سائز۔lysate کو 10 بار پتلا کریں اور پھر بڑھا دیں، یا نمونے کے سائز کو کم کریں اور دوبارہ lysis کریں۔

3) ٹشو کے نمونے تازہ نہیں ہیں۔تازہ بافتوں کے نمونے استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

4) ناقص پرائمر کا معیار۔پرائمر کے معیار کی تصدیق کرنے اور پرائمر ڈیزائن کو بہتر بنانے کے لیے ایمپلیفیکیشن کے لیے جینومک ڈی این اے کا استعمال کریں۔

2.غیر مخصوص پرورش

1) اینیلنگ کا درجہ حرارت بہت کم ہے اور سائیکل نمبر بہت زیادہ ہے۔اینیلنگ درجہ حرارت میں اضافہ کریں اور سائیکلوں کی تعداد کو کم کریں؛

2) ٹیمپلیٹ کا ارتکاز بہت زیادہ ہے۔ٹیمپلیٹ کی مقدار کو کم کریں یا امپلیفیکیشن کے بعد ٹیمپلیٹ کو 10 بار پتلا کریں۔

3) پرائمر کی ناقص خصوصیت۔پرائمر ڈیزائن کو بہتر بنائیں۔

نوٹس

1۔نمونوں کے درمیان کراس آلودگی سے بچنے کے لیے، ایک سے زیادہ نمونے لینے والے اوزار تیار کیے جائیں، اور اگر بار بار استعمال کی ضرورت ہو تو ہر نمونے کے بعد ٹولز کی سطح کو 2% سوڈیم ہائپوکلورائٹ محلول یا نیوکلک ایسڈ کلینر سے صاف کیا جا سکتا ہے۔

2.ماؤس کے تازہ ٹشوز استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، اور نمونے لینے کا حجم اتنا بڑا نہیں ہونا چاہیے کہ امپلیفیکیشن کے نتائج کو متاثر نہ کریں۔

3۔Lysis بفر کو بار بار جمنے سے گریز کرنا چاہیے، اور اسے 2~8℃ پر قلیل مدتی متعدد استعمال کے لیے ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔اگر کم درجہ حرارت پر ذخیرہ کیا جائے تو، بارش ہو سکتی ہے، اور استعمال سے پہلے اسے مکمل طور پر تحلیل کر دینا چاہیے۔

4.پی سی آر مکس کو بار بار جمنے سے گریز کرنا چاہیے، اور اسے قلیل مدتی بار بار استعمال کے لیے 4℃ پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔

5۔یہ پروڈکٹ صرف سائنسی تجرباتی تحقیق کے لیے ہے اور اسے طبی تشخیص یا علاج میں استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔