ملٹی پلیکس کیو پی سی آر پروب پریمکس
بلی نمبر: HCB5051A
تقمان ملٹی پلیکس کیو پی سی آر ماسٹر مکس (ڈائی بیسڈ) 2 × ریئل ٹائم مقداری پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے لیے ایک پری حل ہے جس کی خصوصیت اعلیٰ حساسیت اور خاصیت ہے، جس کا رنگ نیلا ہے، اور نمونے کے اضافے کا اثر رکھتا ہے۔یہ پروڈکٹ ایک 2× مکس پری مکسڈ ریجنٹ ہے جو ایک ہی رد عمل میں چار فلوروسینٹ مقداری PCR رد عمل کو اچھی طرح سے قابل بناتا ہے۔اس پروڈکٹ میں ہاٹ سٹارٹ Taq انزائم کے لیے جینیاتی طور پر تبدیل شدہ اینٹی باڈی کا طریقہ شامل ہے، جس سے ایمپلیفیکیشن کی حساسیت اور مخصوصیت میں بہت بہتری آتی ہے۔ایک ہی وقت میں، اس پروڈکٹ نے ملٹی ری ایکشن بفر کو گہرائی سے بہتر بنایا ہے، جو ری ایکشن کی ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو بہتر بنا سکتا ہے اور کم ارتکاز والے ٹیمپلیٹس کی موثر پرورش کو فروغ دے سکتا ہے۔اس پروڈکٹ کو جین ٹائپنگ اور ملٹی پلیکس مقداری تجزیہ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
تفصیلات
| ہاٹ سٹارٹ | بلٹ میں گرم آغاز |
| پتہ لگانے کا طریقہ | پرائمر پروب کا پتہ لگانا |
| پی سی آر کا طریقہ | کیو پی سی آر |
| پولیمریز | طاق ڈی این اے پولیمریز |
| نمونے کی قسم | ڈی این اے |
ذخیرہ کرنے کی شرائط
پروڈکٹ کو خشک برف کے ساتھ بھیجا جاتا ہے اور اسے 2 سال کے لیے -25~-15℃ پر اسٹور کیا جا سکتا ہے۔
ہدایات
1. رد عملسسٹم
| اجزاء | حجم (μL) | حتمی ارتکاز |
| 2× TaqMan ملٹی پلیکس qPCR ماسٹر مکس | 12.5 | 1× |
| پرائمر مکس (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| پروب مکس (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox حوالہ ڈائی | 0.5 | 1× |
| ٹیمپلیٹ DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ڈی ڈی ایچ2O | 25 تک | - |
نوٹس:استعمال سے پہلے اچھی طرح مکس کریں تاکہ زوردار ہلنے سے ضرورت سے زیادہ بلبلوں سے بچا جا سکے۔
aپرائمر کا ارتکاز: پرائمر مکس میں پرائمر کے متعدد جوڑے ہوتے ہیں، عام طور پر ہر ایک پرائمر 0.2 μmol/L کے حتمی ارتکاز پر ہوتا ہے اور اسے 0.1 اور 0.5 μmol/L کے درمیان بھی ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
بتحقیقات کا ارتکاز: پروب مکس میں مختلف فلوروسینس سگنلز کے ساتھ متعدد پروبس ہوتے ہیں، اور ہر پروب کی حراستی کو مخصوص صورتحال کے مطابق 50 اور 250 nmol/L کے درمیان ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
1۔روکس ڈائی حوالہ: یہ ریئل ٹائم پی سی آر ایمپلیفیکیشن انسٹرومنٹ جیسے اپلائیڈ بایو سسٹم پر استعمال کیا جاتا ہے تاکہ کنویں کے درمیان پیدا ہونے والے فلوروسینس سگنل کی خرابی کو درست کیا جا سکے۔اس پروڈکٹ میں Rox ڈائی کا حوالہ نہیں ہے۔اگر ضرورت ہو تو Cas#10200 تجویز کی جاتی ہے۔
2.ٹیمپلیٹ کو کم کرنا: کیو پی سی آر انتہائی حساس ہے، اور استعمال کے لیے ٹیمپلیٹ کو کمزور کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔اگر ٹیمپلیٹ سی ڈی این اے اسٹاک حل ہے، تو ٹیمپلیٹ کا حجم کل حجم کے 1/10 سے زیادہ نہیں ہونا چاہیے۔
3۔رد عمل کا نظام: 25μL,30μL یا 50 μL کی سفارش کی جاتی ہے تاکہ ہدف جین پروردن کی تاثیر اور تکرار کو یقینی بنایا جا سکے۔
4.سسٹم کی تیاری: براہ کرم سپر کلین بینچ میں تیار کریں، اور نیوکلیز باقیات کے بغیر ٹپس اور ری ایکشن ٹیوبز کا استعمال کریں۔یہ فلٹر کارتوس کے ساتھ تجاویز کا استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے.کراس آلودگی اور ایروسول آلودگی سے بچیں۔
2.رد عمل کا پروگرام
| سائیکل مرحلہ | درجہ حرارت. | وقت | سائیکل |
| ابتدائی ڈینیچریشن | 95 ℃ | 5 منٹ | 1 |
| ڈینیچریشن | 95 ℃ | 15 سیکنڈ | 45 |
| اینیلنگ/توسیع | 60 ℃ | 30 سیکنڈ |
نوٹس:
1.اینیلنگ/توسیع: درجہ حرارت اور وقت کو ڈیزائن کردہ پرائمر Tm قدر کے مطابق مناسب طریقے سے ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
2.فلوروسینس سگنل کا حصول: مختلف qPCR کا پتہ لگانے والے آلات کے لیے فلوروسینس سگنل کے حصول کا وقت مختلف ہے، براہ کرم کم از کم وقت کی حد کے مطابق سیٹ کریں۔کئی عام آلات کا وقت درج ذیل ہے:
20 سیکنڈ: اپلائیڈ بایو سسٹم 7700، 7900HT، 7500 فاسٹ
31 سیکنڈ: اپلائیڈ بایو سسٹم 7300
32 سیکنڈ: اپلائیڈ بایو سسٹم 7500
نوٹس
براہ کرم اپنی صحت اور حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے ضروری PPE، جیسا کہ لیب کوٹ اور دستانے پہنیں!
