ملٹی پلیکس ون سٹیپ RT-qPCR Premix-UNG
بلی نمبر: HCB5145A
ملٹی پلیکس ون سٹیپ آر ٹی-کیو پی سی آر پروب کٹ (یو ڈی جی پلس) ایک ملٹی پلس مقداری پی سی آر کٹ ہے جو کہ آر این اے پر بطور ٹیمپلیٹ ہے۔تجربے کے عمل میں، ایک ہی ٹیوب میں ریورس ٹرانسکرپشن اور مقداری پی سی آر کیے گئے، جس نے تجرباتی آپریشن کو آسان بنایا اور آلودگی کے خطرے کو کم کیا۔اس کٹ میں، پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کو ہیٹ ریزسٹنٹ ریورس ٹرانسکرپٹیس کے ذریعے مؤثر طریقے سے ترکیب کیا گیا اور ہاٹ اسٹارٹ ٹیگ ڈی این اے پولیمریز کے ذریعے مقداری طور پر بڑھایا گیا۔کٹ بنیادی طور پر آپٹمائزڈ ایم پی بفر، انزائمز مکس وغیرہ پر مشتمل ہے۔ بفر سلوشن میں پہلے سے ہی ایم جی2+اور ڈی این ٹی پی۔اس کے علاوہ، وہ عوامل جو غیر مخصوص پی سی آر ایمپلیفیکیشن کو مؤثر طریقے سے روک سکتے ہیں اور ایک سے زیادہ کیو پی سی آر ری ایکشنز کی ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو بہتر بنا سکتے ہیں، شامل کیے گئے ہیں، جو ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو یقینی بنا سکتے ہیں اور متعدد ایمپلیفیکیشن ری ایکشن تک انجام دے سکتے ہیں۔dUTP/UDG سسٹم کو مؤثر طریقے سے ایروسول آلودگی کے خطرے کو روکنے کے لیے شامل کیا گیا تھا۔
اجزاء
1. بفر
2. انزائم مکس
تفصیلات
| ہاٹ سٹارٹ | بلٹ میں گرم آغاز |
| پتہ لگانے کا طریقہ | پرائمر پروب کا پتہ لگانا |
| پی سی آر کا طریقہ | ایک قدم RT-qPCR |
| پولیمریز | طاق ڈی این اے پولیمریز |
| نمونے کی قسم | ڈی این اے |
ذخیرہ کرنے کی شرائط
پروڈکٹ کو خشک برف کے ساتھ بھیج دیا جاتا ہے اور اسے 1 سال کے لیے -25~-15℃ پر اسٹور کیا جا سکتا ہے۔اسے کثرت سے گریز کرنا چاہیے۔منجمد پگھلنایہ الگ سے بچانے کی سفارش کی جاتی ہے۔
ہدایات
1.رد عمل سسٹم
| اجزاء | حجم (μL) | حتمی ارتکاز |
| 2 × ایم پی بفر | 12.5 | 1× |
| انزائم مکس | 1 | - |
| پرائمر/پروب مکس (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ٹیمپلیٹ آر این اے | 1-10 | - |
| RNase مفت H2O | 25 تک | - |
نوٹس:
استعمال کرنے سے پہلے اچھی طرح مکس کرنا یقینی بنائیں، پرتشدد کمپن کی وجہ سے زیادہ بلبلوں سے بچیں۔
aپرائمر کا ارتکاز: پرائمر مکس جس میں ملٹی پلیکس پرائمر بھی شامل ہے، صورتحال پر منحصر ہے کہ پرائمر کا زیادہ سے زیادہ ارتکاز 0.l اور 1.0μM کے درمیان ہو سکتا ہے۔
بتحقیقات کا ارتکاز: پروب مکس بشمول ملٹی پلیکس پروب لیبلنگ فرق فلوروسینٹ گروپ، صورتحال پر منحصر ہے کہ زیادہ سے زیادہ تحقیقات کا ارتکاز 0.05 اور 0.5μM کے درمیان ہو سکتا ہے۔
cٹیمپلیٹ کو کم کرنا: کیو پی سی آر انتہائی حساس ہے اور ٹیمپلیٹ کو کمزور کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔کنٹرول Ct قدر 20 اور 35 کے درمیان موزوں ہے۔
ڈیسسٹم کی تیاری: براہ کرم انتہائی صاف ورکنگ ٹیبل میں تیار کریں، اور پائپٹر اور ری ایکشن ٹیوب بغیر نیوکلیز باقیات کے؛بندوق کے سر کو فلٹر عنصر کے ساتھ استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔کراس آلودگی اور ایروسول آلودگی سے بچیں۔
2. آپٹمائزڈ سائیکلنگپروٹوکول
| سائیکل قدم | درجہ حرارت | وقت | سائیکل |
| ریورس ٹرانسکرپشن | 50℃a | 20 منٹ | 1 |
| ابتدائی ڈینیچریشن | 95℃ | 5 منٹ | 1 |
| ایمپلیفیکیشن رد عمل | 95℃ | 15 سیکنڈ |
40-45 |
| 60℃ b | 30 سیکنڈ c |
نوٹس:
aریورس ٹرانسکرپشن: درجہ حرارت 42 ° C یا 50 ° C کا انتخاب کر سکتا ہے۔
بایمپلیفیکیشن ری ایکشن: درجہ حرارت کو ڈیزائن کردہ پرائمر کی Tm قدر کے مطابق ایڈجسٹ کیا جاتا ہے۔
cفلوروسینس سگنل کا حصول: براہ کرم تجرباتی طریقہ کار کو آلہ دستی کی ضروریات کے مطابق ترتیب دیں۔
نوٹس
اپنی صحت اور حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے براہ کرم ضروری PPE، جیسے لیب کوٹ اور دستانے پہنیں۔
