یونیورسل SYBR GREEN qPCR پریمکس (بلیو)

بلی نمبر: HCB5041B

یونیورسل بلیو کیو پی سی آر ماسٹر مکس (ڈائی بیسڈ) 2×ریئل ٹائم مقداری پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے لیے ایک پری حل ہے جس کی خصوصیت اعلیٰ حساسیت اور خاصیت ہے، رنگ نیلا ہے، اور نمونے کے اضافے کا اثر رکھتا ہے۔بنیادی جزو Taq DNA پولیمریز اینٹی باڈی ہاٹ اسٹارٹ کا استعمال کرتا ہے تاکہ نمونے کی تیاری کے دوران پرائمر اینیلنگ کی وجہ سے غیر مخصوص ایمپلیفیکیشن کو مؤثر طریقے سے روک سکے۔ایک ہی وقت میں، فارمولہ پی سی آر کے رد عمل کی افادیت کی کارکردگی کو بہتر بنانے اور مختلف GC مواد (30 ~ 70%) کے ساتھ جینز کی افزائش کو برابر کرنے کے لیے فروغ دینے والے عوامل کو شامل کرتا ہے، تاکہ مقداری PCR وسیع مقدار میں ایک اچھا لکیری تعلق حاصل کر سکے۔ علاقہاس پروڈکٹ میں خصوصی ROX Passive Reference Dye ہے، جو زیادہ تر qPCR آلات پر لاگو ہوتا ہے۔مختلف آلات پر ROX کے ارتکاز کو ایڈجسٹ کرنا ضروری نہیں ہے۔یہ صرف پرائمر اور ٹیمپلیٹس کو شامل کرنے کے لئے ضروری ہے تاکہ پرورش کے لئے ردعمل کے نظام کو تیار کیا جا سکے.

اجزاء

یونیورسل بلیو کیو پی سی آر ماسٹر مکس

ذخیرہ کرنے کے حالات

پروڈکٹ کو آئس پیک کے ساتھ بھیجا جاتا ہے اور اسے 18 ماہ کے لیے -25℃~-15℃ پر اسٹور کیا جا سکتا ہے۔رد عمل کے نظام کو ذخیرہ کرنے یا تیار کرتے وقت تیز روشنی کی شعاعوں سے بچنا ضروری ہے۔

تفصیلات

ہدایات

1. رد عمل کا نظام

[نوٹ]: استعمال سے پہلے اچھی طرح مکس کریں تاکہ زور سے ہلنے سے زیادہ بلبلوں سے بچا جا سکے۔

a) پرائمر کا ارتکاز: حتمی پرائمر ارتکاز 0.2μmol/L ہے، اور اسے 0.1 اور 1.0μmol/L کے درمیان بھی ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔

b) ٹیمپلیٹ کا ارتکاز: اگر ٹیمپلیٹ سی ڈی این اے اسٹاک سلوشن کو غیر منقطع کیا گیا ہے تو استعمال شدہ حجم qPCR رد عمل کے کل حجم کے 1/10 سے زیادہ نہیں ہونا چاہیے۔

ج) ٹیمپلیٹ ڈیلیشن: سی ڈی این اے سٹاک محلول کو 5-10 بار پتلا کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔شامل کردہ ٹیمپلیٹ کی زیادہ سے زیادہ مقدار اس وقت بہتر ہوتی ہے جب ایمپلیفیکیشن کے ذریعے حاصل کردہ Ct قدر 20-30 سائیکل ہو۔

d) رد عمل کا نظام: 20μL یا 50μL استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے تاکہ ٹارگٹ جین ایمپلیفیکیشن کی تاثیر اور تکرار کو یقینی بنایا جا سکے۔

e) سسٹم کی تیاری: براہ کرم سپر کلین بینچ میں تیاری کریں اور نیوکلیز باقیات کے بغیر ٹپس اور ری ایکشن ٹیوبز کا استعمال کریں۔یہ فلٹر کارتوس کے ساتھ تجاویز کا استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے.کراس آلودگی اور ایروسول آلودگی سے بچیں۔

2.رد عمل کا پروگرام

معیاری پروگرام

فوری پروگرام

[نوٹ]: فاسٹ پروگرام جینوں کی اکثریت کے لیے موزوں ہے، اور معیاری پروگرام انفرادی پیچیدہ ثانوی ساخت کے جینز کے لیے آزمائے جا سکتے ہیں۔

a) اینیلنگ کا درجہ حرارت اور وقت: براہ کرم پرائمر اور ٹارگٹ جین کی لمبائی کے مطابق ایڈجسٹ کریں۔

b) فلوروسینس سگنل کا حصول (★): براہ کرم آلہ کے استعمال کے لیے ہدایات میں دی گئی ضروریات کے مطابق تجرباتی طریقہ کار مرتب کریں۔

c) پگھلنے کا وکر: آلہ کا طے شدہ پروگرام عام طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

3. نتائج کا تجزیہ 

مقداری تجربات کے لیے کم از کم تین حیاتیاتی نقلیں درکار تھیں۔ردعمل کے بعد، امپلیفیکیشن وکر اور پگھلنے والی وکر کی تصدیق کی ضرورت ہے.

3.1 ایمپلیفیکیشن وکر:

معیاری امپلیفیکیشن وکر S کے سائز کا ہے۔مقداری تجزیہ اس وقت سب سے زیادہ درست ہوتا ہے جب Ct کی قدر 20 اور 30 ​​کے درمیان آتی ہے۔ اگر Ct کی قدر 10 سے کم ہے، تو ٹیمپلیٹ کو کمزور کرنا اور دوبارہ ٹیسٹ کرنا ضروری ہے۔جب Ct قدر 30-35 کے درمیان ہوتی ہے، تو یہ ضروری ہے کہ ٹیمپلیٹ کی ارتکاز یا رد عمل کے نظام کے حجم کو بڑھایا جائے، تاکہ ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو بہتر بنایا جا سکے اور نتائج کے تجزیہ کی درستگی کو یقینی بنایا جا سکے۔جب Ct قدر 35 سے زیادہ ہوتی ہے، تو ٹیسٹ کے نتائج جین کے اظہار کا مقداری تجزیہ نہیں کر سکتے، لیکن کوالٹیٹیو تجزیہ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔

3.2 پگھلنے کا وکر:

پگھلنے کے منحنی خطوط کی واحد چوٹی اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ رد عمل کی خاصیت اچھی ہے اور مقداری تجزیہ کیا جا سکتا ہے۔اگر پگھلنے کا منحنی خطوط دوہری یا ایک سے زیادہ چوٹیوں کو دکھاتا ہے، تو مقداری تجزیہ نہیں کیا جا سکتا۔پگھلنے کا منحنی خطوط دوہری چوٹیوں کو ظاہر کرتا ہے، اور یہ فیصلہ کرنا ضروری ہے کہ آیا غیر ہدف کی چوٹی پرائمر ڈائمر ہے یا ڈی این اے ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ غیر مخصوص پروردن۔اگر یہ ایک پرائمر ڈائمر ہے، تو اس کی سفارش کی جاتی ہے کہ پرائمر کے ارتکاز کو کم کیا جائے یا اعلی ایمپلیفیکیشن کارکردگی کے ساتھ پرائمر کو دوبارہ ڈیزائن کریں۔اگر یہ غیر مخصوص امپلیفیکیشن ہے، تو براہ کرم اینیلنگ کا درجہ حرارت بڑھائیں، یا پرائمر کو مخصوصیت کے ساتھ دوبارہ ڈیزائن کریں۔

نوٹس

اپنی صحت اور حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے براہ کرم ضروری PPE، جیسا کہ لیب کوٹ اور دستانے پہنیں！

یہ پروڈکٹ صرف تحقیقی استعمال کے لیے ہے！