رنیس اے
Ribonuclease A (RNaseA) ایک واحد پھنسے ہوئے پولی پیپٹائڈ ہے جس میں 4 ڈسلفائیڈ بانڈز ہیں جن کا مالیکیولر وزن تقریباً 13.7 kDa ہے۔RNase A ایک endoribonuclease ہے جو خاص طور پر C اور U کی باقیات پر واحد پھنسے ہوئے RNA کو کم کرتا ہے۔خاص طور پر، کلیویج ایک نیوکلیوٹائڈ کے 5′-رائبوز اور فاسفیٹ گروپ سے ملحقہ پیریمائڈائن نیوکلیوٹائڈ کے 3′-رائبوز کے ذریعے بننے والے فاسفوڈیسٹر بانڈ کو پہچانتا ہے، تاکہ 2، 3′-سائکلک فاسفیٹس 3′-سائکلک فاسفیٹائڈ ہو ′نیوکلیوسائیڈ فاسفیٹس (مثلاً pG-pG-pC-pA-pG کو RNase A کے ذریعے pG-pG-pCp اور A-PG پیدا کرنے کے لیے کلیو کیا جاتا ہے)۔RNase A واحد پھنسے ہوئے RNA کو صاف کرنے میں سب سے زیادہ فعال ہے۔تجویز کردہ کام کا ارتکاز 1-100μG/mL ہے، مختلف رد عمل کے نظام کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔کم نمک کا ارتکاز (0-100 mM NaCl) سنگل سٹرینڈڈ RNA، ڈبل پھنسے ہوئے RNA، اور RNA-DNA ہائبرڈائزیشن سے بننے والی RNA چینز کو کاٹنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔تاہم، نمک کے زیادہ ارتکاز (≥0.3 M) میں، RNase A صرف خاص طور پر سنگل پھنسے ہوئے RNA کو صاف کرتا ہے۔
RNase A کا استعمال عام طور پر پلاسمڈ DNA یا genomic DNA کی تیاری کے دوران RNA کو ہٹانے کے لیے کیا جاتا ہے۔ تیاری کے عمل کے دوران DNase فعال ہو یا نہ ہو، ردعمل کو آسانی سے متاثر کر سکتا ہے۔پانی کے غسل میں ابالنے کا روایتی طریقہ DNase کی سرگرمی کو غیر فعال کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔اس پروڈکٹ میں DNase اور پروٹیز شامل نہیں ہے، اور استعمال سے پہلے گرمی کے علاج کی ضرورت نہیں ہے۔اس کے علاوہ، اس پروڈکٹ کو مالیکیولر بائیولوجی کے تجربات میں بھی استعمال کیا جا سکتا ہے جیسے کہ RNase تحفظ تجزیہ اور RNA ترتیب تجزیہ۔
ذخیرہ کرنے کی شرائط
پروڈکٹ کو -25～-15℃ پر اسٹور کیا جا سکتا ہے، جو 2 سال کے لیے درست ہے۔
ہدایات
یہ RNase A سٹوریج حل تیار کرنے کے عام طریقوں میں سے ایک ہے۔کے ذریعے بھی تیار کیا جا سکتا ہے۔لیبارٹری یا ریفرنس لٹریچر میں روایتی طریقوں کے مطابق دوسرے طریقے (جیسے10 mM Tris-HCl، pH 7.5 یا Tris-NaCl محلول میں براہ راست تحلیل)
1. RNase A سٹوریج سلوشن کا 10 mg/mL تیار کرنے کے لیے 10 mM سوڈیم ایسیٹیٹ (pH 5.2) استعمال کریں۔
2. 15 منٹ کے لیے 100 ℃ پر ہیٹنگ
3. کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کریں، 1 M Tris-HCl (pH 7.4) کا 1/10 والیوم شامل کریں، اس کے pH کو 7.4 پر ایڈجسٹ کریں (کے لیے)مثال کے طور پر، 500 ملی لیٹر 10 گرام/ ملی لیٹر RNase اسٹوریج سلوشن 1M Tris-HCL، PH7.4 شامل کریں)
4. منجمد اسٹوریج کے لیے -20℃ پر ذیلی پیک کیا گیا، جو 2 سال تک مستحکم رہ سکتا ہے۔
[نوٹ]: غیر جانبدار حالات میں RNaseA محلول کو ابالتے وقت، RNase ورن بنتی ہے۔اسے کم پی ایچ پر ابالیں، اور اگر بارش ہو تو اس کا مشاہدہ کیا جا سکتا ہے، جو کہ پروٹین کی نجاست کی موجودگی کی وجہ سے ہو سکتا ہے۔اگر ابلنے کے بعد تلچھٹ مل جائے تو تیز رفتار سینٹرفیوگریشن (13000rpm) کے ذریعے نجاست کو ہٹایا جا سکتا ہے، اور پھر منجمد کرنے کے لیے سب پیک کیا جا سکتا ہے۔
مصنوعات کی معلومات
| مترادفات | Ribonuclease I؛لبلبے کی ریبونیوکلیز؛رائبونیوکلیز 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase؛Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS نمبر | 9001-99-4 |
| ظہور | سفید لائو فلائزڈ پاؤڈر |
| سالماتی وزن | ~ 13.7kDa (امائنو ایسڈ کی ترتیب) |
| پی ایچ ویلیو | 7.6 (سرگرمی کی حد 6-10) |
| مناسب درجہ حرارت | 60℃ (سرگرمی کی حد 15-70℃) |
| فعال کرنے والا ایجنٹ | Na2+.کے+ |
| روکنے والا | Rnase inhibitor |
| غیر فعال کرنے کا طریقہ | گرم کرنے سے غیر فعال نہیں کیا جا سکتا، یہ سینٹرفیوج کالم استعمال کرنے کی تجویز کی جاتی ہے۔ |
| اصل | بوائین |
| حل پذیری | پانی میں گھلنشیل (10mg/ml) |
| خشک ہونے پر نقصان | ≤5.0% |
| انزائم کی سرگرمی | ≥60 کنٹز یونٹس/ملی گرام |
| آئیسو الیکٹرک پوائنٹ | 9.6 |
نوٹس
اپنی حفاظت اور صحت کے لیے، براہ کرم لیب کوٹ اور آپریشن کے لیے ڈسپوزایبل دستانے پہنیں۔
