نمونہ ریلیز ریجنٹ
نمونہ ریلیز ریجنٹ سالماتی POCT تشخیصی منظرناموں کے لیے ہے۔ڈائریکٹ ایمپلیفیکیشن LAMP اور ڈائریکٹ ایمپلیفیکیشن PCR کے دو سسٹمز کے لیے، نیوکلک ایسڈ نکالنے کی ضرورت نہیں ہے۔نمونے کے خام لیسیٹ کو براہ راست بڑھایا جا سکتا ہے، ہدف کے جین کا درست پتہ لگایا جا سکتا ہے، نمونے کا پتہ لگانے کے وقت کو مزید مختصر کیا جا سکتا ہے، جو مالیکیولر POCT کی درخواست کی ضروریات سے بالکل میل کھاتا ہے۔یہ ناک کی جھاڑیوں، گلے کی جھاڑیوں اور دیگر نمونوں کی اقسام کے لیے موزوں ہے۔پروسیس شدہ نمونوں کو ریئل ٹائم فلوروسینس مقداری PCR یا LAMP کا پتہ لگانے کے لیے براہ راست استعمال کیا جا سکتا ہے، اور وہی نتائج حاصل کیے جا سکتے ہیں جو روایتی نکالنے کے طریقوں سے پیچیدہ نیوکلک ایسڈ نکالنے کے آپریشن کے بغیر حاصل کیے جا سکتے ہیں۔
ذخیرہ کرنے کی شرائط
کمرے کے درجہ حرارت پر ٹرانسپورٹ اور اسٹور کریں۔
کوالٹی کنٹرول
فنکشنل ڈٹیکشن - مقداری qPCR: 800μl نمونہ ریلیز ریجنٹ سسٹم کو بڑھا دیا گیا تھا۔
1000 کاپیاں ناول سیوڈوائرس کے ساتھ، ایک ناک کی جھاڑی کا نمونہ، جس کے نتیجے میں اسی طرح کے ایمپلیفیکیشن منحنی خطوط اورΔCt قدریں ± 0.5 Ct کے اندر۔
تجرباتی طریقہ کارres
1. 800 μl سیمپل ریلیز ریجنٹ لیں اور 1.5 ملی لیٹر سیمپلنگ ٹیوب میں لیسز سلوشن پھیلائیں۔
2. جھاڑو کے ساتھ ناک کی جھاڑو یا گلے کا جھاڑو لیں؛ ناک کے جھاڑو کے نمونے لینے کا طریقہ: جراثیم سے پاک جھاڑو لیں اور اسے نتھنوں میں ڈالیں، آہستہ آہستہ تقریباً 1.5 سینٹی میٹر گہرائی تک بڑھیں، 15 سیکنڈ سے زیادہ کے لیے ناک کے بلغم کے خلاف آہستہ سے 4 بار گھمائیں۔ ، پھر اسی جھاڑو کے ساتھ دوسرے ناک کی گہا پر اسی آپریشن کو دہرائیں۔ گلے کے جھاڑو کے نمونے لینے کے طریقہ کار: جراثیم سے پاک جھاڑو لیں اور آہستہ سے ، فوری طور پر 3 بار گرنی کے ٹانسلز اور پیچھے کی نالی کی دیوار کو صاف کریں۔
3۔جھاڑو کو فوری طور پر سیمپلنگ ٹیوب میں رکھیں۔جھاڑو کے سر کو کم از کم 30 سیکنڈ کے لیے سٹوریج کے محلول میں گھمایا جائے اور ملایا جائے تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ نمونہ سیمپلنگ ٹیوب میں مکمل طور پر ختم ہو گیا ہے۔
4. کمرے کے درجہ حرارت (20~ 25℃) پر 1 منٹ کے لیے انکیوبیشن، lysis بفر کی تیاری مکمل ہو جاتی ہے۔
5. دونوں 25μl سسٹم RT-PCR اور RT-LAMP پتہ لگانے کے تجربات کے لیے ٹیمپلیٹ کے اضافے کی 10μl مقدار کے ساتھ مطابقت رکھتے تھے۔
نوٹس
1. ایک ہی جھاڑو کے مطابق براہ راست لیسیٹ کے نمونے کی کم از کم مقدار کو 400μl میں ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے، جسے جانچ کی ضروریات کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
2. ایک بار جب نمونے کو سیمپل ریلیز ری ایجنٹ کے ذریعے پروسیس کیا جاتا ہے، تو یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ جلد از جلد ٹیسٹ کا اگلا مرحلہ کروایا جائے، وقفہ انتظار کا وقت ترجیحاً 1 گھنٹے سے کم ہے۔
3. نمونہ lysate کا pH تیزابی ہے، اور پتہ لگانے کے نظام کو ایک مخصوص بفر کی ضرورت ہے۔یہ پی ایچ بفر کے ساتھ زیادہ تر PCR، RT-PCR، اور LAMP فلوروسینس کا پتہ لگانے کے لیے موزوں ہے، لیکن بفر کے بغیر LAMP کلر میٹرک پتہ لگانے کے لیے موزوں نہیں ہے۔
