وائرل DNA/RNA ایکسٹریکشن کٹ
یہ کٹ نمونوں جیسے کہ nasopharyngeal swabs، انوائرمنٹل swabs، سیل کلچر سپرنٹینٹس، اور ٹشو ہوموجینیٹ سپرنٹنٹس سے اعلی پاکیزگی والے وائرل DNA/RNA کو تیزی سے نکالنے کے لیے موزوں ہے۔یہ کٹ سیلیکا میمبرین پیوریفیکیشن ٹیکنالوجی پر مبنی ہے جو اعلیٰ معیار کے وائرل DNA/RNA کو نکالنے کے لیے فینول/کلوروفارم نامیاتی سالوینٹس یا وقت گزارنے والی الکحل کی بارش کو ختم کرتی ہے۔حاصل کردہ نیوکلک ایسڈ نجاست سے پاک ہیں اور بہاوی تجربات جیسے کہ ریورس ٹرانسکرپشن، پی سی آر، آر ٹی-پی سی آر، ریئل ٹائم پی سی آر، نیکسٹ جنریشن سیکوینسنگ (این جی ایس) اور ناردرن بلاٹ میں استعمال کے لیے تیار ہیں۔
ذخیرہ کرنے کے حالات
15 ~ 25 ℃ پر اسٹور کریں، اور کمرے کے درجہ حرارت پر ٹرانسپورٹ کریں۔
اجزاء
| اجزاء | 100RXNS |
| بفر VL | 50 ملی لیٹر |
| بفر آر ڈبلیو | 120 ملی لیٹر |
| RNase فری ddH2 O | 6 ملی لیٹر |
| فاسٹ پیور آر این اے کالمز | 100 |
| مجموعہ ٹیوبیں (2ml) | 100 |
| RNase فری کلیکشن ٹیوبز (1.5ml) | 100 |
بفر VL:lysis اور بائنڈنگ کے لئے ایک ماحول فراہم کریں.
بفر RW:بقایا پروٹین اور دیگر نجاست کو ہٹا دیں۔
RNase فری ddH2O:اسپن کالم میں جھلی سے ایلوٹ DNA/RNA۔
فاسٹ پیور آر این اے کالم:خاص طور پر ڈی این اے/آر این اے کو جذب کرتا ہے۔
مجموعہ ٹیوبیں 2 ملی لیٹر:فلٹریٹ جمع کریں۔
آر نیس فری کلیکشن ٹیوبز 1.5 ملی لیٹر:DNA/RNA جمع کریں۔
درخواستیں
Nasopharyngeal swabs، انوائرمنٹل swabs، سیل کلچر سپرنٹنٹس، اور ٹشو ہوموجنیٹ سپرنٹینٹس۔
خود تیار شدہ میٹرials
RNase فری پائپیٹ ٹپس، 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوبیں، سینٹری فیوج، ورٹیکس مکسر، اور پائپیٹ۔
تجرباتی عمل
بائیو سیفٹی کیبنٹ میں درج ذیل تمام اقدامات انجام دیں۔
1. نمونے کا 200 μl RNase فری سینٹری فیوج ٹیوب میں شامل کریں (ناکافی نمونے کی صورت میں PBS یا 0.9% NaCl کے ساتھ بنائیں)، 500 μl بفر VL شامل کریں، 15 – 30 سیکنڈ کے لیے بھنور ڈال کر اچھی طرح مکس کریں، اور سینٹری فیوج مختصر طور پر ٹیوب کے نچلے حصے میں مرکب کو جمع کرنے کے لئے.
2. فاسٹ پیور آر این اے کالموں کو ایک مجموعہ ٹیوب میں 2 ملی لیٹر رکھیں۔مرکب کو مرحلہ 1 سے فاسٹ پیور آر این اے کالمز میں منتقل کریں، 1 منٹ کے لیے 12,000 rpm (13,400 × g) پر سینٹری فیوج کریں، اور فلٹریٹ کو ضائع کریں۔
3. فاسٹ پیور آر این اے کالمز میں 600 μl بفر RW شامل کریں، 30 سیکنڈ کے لیے 12,000 rpm (13,400 × g) پر سینٹری فیوج کریں، اور فلٹریٹ کو ضائع کریں۔
4. مرحلہ 3 دہرائیں۔
5. خالی کالم کو 12,000 rpm (13,400 × g) پر 2 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں۔
6. فاسٹ پیور آر این اے کالمز کو احتیاط سے ایک نئی RNase فری کلیکشن ٹیوب 1.5 ملی لیٹر (کِٹ میں فراہم کی گئی) میں منتقل کریں اور کالم کو چھوئے بغیر جھلی کے بیچ میں 30 – 50 μl RNase فری ddH2O شامل کریں۔کمرے کے درجہ حرارت پر 1 منٹ کھڑے ہونے دیں اور 1 منٹ کے لیے 12,000 rpm (13,400 × g) پر سینٹری فیوج کریں۔
7. فاسٹ پیور آر این اے کالمز کو ضائع کریں۔ڈی این اے/آر این اے کو براہ راست بعد کے اسیس کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، یا مختصر مدت کے لیے -30 ~ -15 ° C یا طویل مدت کے لیے -85 ~ -65 ° C پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔
نوٹس
صرف تحقیق کے لیے استعمال کریں۔تشخیصی طریقہ کار میں استعمال کے لیے نہیں۔
1. نمونوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر پہلے سے متوازن کریں۔
2. وائرس انتہائی متعدی ہوتے ہیں۔براہ کرم یقینی بنائیں کہ تجربے سے پہلے تمام ضروری حفاظتی احتیاطی تدابیر اختیار کی گئی ہیں۔
3. نمونے کو بار بار جمانے اور پگھلنے سے گریز کریں، کیونکہ یہ نکالے گئے وائرل DNA/RNA کی تنزلی یا پیداوار میں کمی کا باعث بن سکتا ہے۔
4. خود سے تیار کردہ آلات میں RNase سے پاک پائپیٹ ٹپس، 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوب، سینٹری فیوج، ورٹیکس مکسر، اور پائپیٹ شامل ہیں۔
5. کٹ استعمال کرتے وقت، لیب کوٹ، ڈسپوزایبل لیٹیکس دستانے، اور ڈسپوزایبل ماسک پہنیں اور RNase آلودگی کے خطرے کو کم کرنے کے لیے RNase فری استعمال کی اشیاء استعمال کریں۔
6. کمرے کے درجہ حرارت پر تمام اقدامات انجام دیں جب تک کہ دوسری صورت میں وضاحت نہ کی گئی ہو۔
میکانزم اور ورک فلو
