وائرس DNA/RNA نکالنے کی کٹ
کٹ (HC1009B) مختلف مائع نمونوں جیسے کہ خون، سیرم، پلازما، اور جھاڑو دھونے والے مائع سے ہائی پیوریٹی وائرل نیوکلک ایسڈز (DNA/RNA) تیزی سے نکال سکتی ہے، جس سے متوازی نمونوں کی ہائی تھرو پٹ پروسیسنگ ممکن ہوتی ہے۔کٹ میں منفرد ایمبیڈڈ سپر پیرا میگنیٹک سلکان پر مبنی مقناطیسی موتیوں کا استعمال کیا گیا ہے۔ایک منفرد بفر سسٹم میں، پروٹین اور دیگر نجاستوں کی بجائے نیوکلک ایسڈ ہائیڈروجن بانڈز اور الیکٹرو سٹیٹک بائنڈنگ کے ذریعے جذب ہوتے ہیں۔نیوکلک ایسڈ کو جذب کرنے والے مقناطیسی موتیوں کو باقی پروٹین اور نمکیات کو دور کرنے کے لیے دھویا جاتا ہے۔کم نمک والے بفر کا استعمال کرتے وقت، نیوکلک ایسڈ مقناطیسی موتیوں سے خارج ہوتے ہیں، تاکہ نیوکلک ایسڈز کی تیزی سے علیحدگی اور پاکیزگی کا مقصد حاصل کیا جا سکے۔آپریشن کا پورا عمل آسان، تیز، محفوظ اور موثر ہے، اور حاصل کردہ نیوکلک ایسڈز کو براہ راست نیچے کی طرف سے کیے جانے والے تجربات جیسے ریورس ٹرانسکرپشن، PCR، qPCR، RT-PCR، RT-qPCR، اگلی نسل کی ترتیب، بائیو چِپ تجزیہ، کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ وغیرہ
ذخیرہ کرنے کے حالات
15~25℃ پر اسٹور کریں، اور کمرے کے درجہ حرارت پر ٹرانسپورٹ کریں۔
درخواستیں
خون، سیرم، پلازما، swab eluent، ٹشو homogenate اور زیادہ.
تجرباتی عمل
1. نمونہ پروسیسنگ
1.1 مائع نمونوں میں وائرس کے لیے جیسے کہ خون، سیرم اور پلازما: 300μL سپرناٹینٹ نکالنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
2.2 جھاڑو کے نمونوں کے لیے: جھاڑو کے نمونوں کو نمونے لینے والی ٹیوبوں میں رکھیں جس میں پرزرویشن سلوشن، 1 منٹ کے لیے ورٹیکس، اور نکالنے کے لیے 300μL سپرناٹینٹ لیں۔
1.3 ٹشو ہوموجنیٹس، ٹشوزوک سلوشنز، اور ماحولیاتی نمونوں میں وائرس کے لیے: نمونے 5-10 منٹ تک کھڑے رہیں، اور نکالنے کے لیے 300μL سپرناٹینٹ لیں۔
2. کی تیاری تیاریاکیجڈ ری ایجنٹ
کٹ سے پہلے سے پیک شدہ ریجنٹس کو نکالیں، مقناطیسی موتیوں کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے کئی بار الٹیں اور مکس کریں۔ریجنٹس اور مقناطیسی موتیوں کو کنویں کے نیچے تک ڈوبنے کے لیے پلیٹ کو آہستہ سے ہلائیں۔براہ کرم پلیٹ کی سمت کی تصدیق کریں اور سیلنگ ایلومینیم ورق کو احتیاط سے پھاڑ دیں۔
Δ مائع کو پھیلنے سے روکنے کے لیے سیلنگ فلم کو پھاڑتے وقت کمپن سے گریز کریں۔
3. کا آپریشن آٹومatic آلہ
3.1 96 گہری کنویں پلیٹ کے کالم 1 یا 7 میں کنوؤں میں 300μL نمونہ شامل کریں (مؤثر کام کرنے والی اچھی پوزیشن پر توجہ دیں)۔نمونے کا ان پٹ حجم 100-400 μL کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔
3.2 96 کنویں گہری کنویں کی پلیٹ کو نیوکلک ایسڈ ایکسٹریکٹر میں ڈالیں۔مقناطیسی بار کی آستینیں لگائیں، اور یقینی بنائیں کہ وہ مقناطیسی سلاخوں کو مکمل طور پر لپیٹے ہوئے ہیں۔
3.3 خودکار نکالنے کے لیے مندرجہ ذیل پروگرام ترتیب دیں:
3.4 نکالنے کے بعد، 96 گہری کنویں پلیٹ کے کالم 6 یا 12 سے ایلیوینٹ کو ایک صاف نیوکلیز فری سینٹری فیوج ٹیوب میں منتقل کریں (کنویں کی موثر پوزیشن پر توجہ دیں)۔اگر آپ اسے فوری طور پر استعمال نہیں کرتے ہیں، تو براہ کرم مصنوعات کو -20℃ پر اسٹور کریں۔
نوٹس
صرف تحقیق کے لیے استعمال کریں۔تشخیصی طریقہ کار میں استعمال کے لیے نہیں۔
1. نکالی گئی مصنوعات DNA/RNA ہے۔آپریشن کے دوران RNase کے ذریعے RNA کے انحطاط کو روکنے کے لیے خصوصی توجہ دی جانی چاہیے۔استعمال شدہ برتن اور نمونے وقف ہونے چاہئیں۔تمام ٹیوبیں اور پپیٹ ٹپس کو جراثیم سے پاک اور DNase/RNase سے پاک ہونا چاہیے۔آپریٹرز کو پاؤڈر سے پاک دستانے اور ماسک پہننے چاہئیں۔
2. براہ کرم استعمال سے پہلے ہدایات کے دستی کو احتیاط سے پڑھیں، اور ہدایات کے دستی کے مطابق سختی سے کام کریں۔نمونے کی پروسیسنگ الٹرا کلین بینچ یا حیاتیاتی حفاظتی کابینہ میں کی جانی چاہیے۔
3. خودکار نیوکلک ایسڈ نکالنے کے نظام کو استعمال سے پہلے اور بعد میں 30 منٹ تک UV کے ذریعے جراثیم سے پاک کیا جانا چاہیے۔
4. نکالنے کے بعد ایلیونٹ میں مقناطیسی موتیوں کے نشانات باقی رہ سکتے ہیں، لہذا مقناطیسی موتیوں کی خواہش کرنے سے گریز کریں۔اگر مقناطیسی موتیوں کی خواہش کی جاتی ہے، تو اسے مقناطیسی اسٹینڈ سے ہٹایا جا سکتا ہے۔
5. اگر ری ایجنٹس کے مختلف بیچوں کے لیے کوئی خاص ہدایات موجود نہیں ہیں، تو براہ کرم ان کو مکس نہ کریں، اور یقینی بنائیں کہ کٹس درست ہونے کی مدت کے اندر استعمال کی گئی ہیں۔
6. تمام نمونوں اور ری ایجنٹ کو صحیح طریقے سے ٹھکانے لگائیں، تمام کام کی سطحوں کو 75% ایتھنول کے ساتھ اچھی طرح سے صاف کریں اور جراثیم سے پاک کریں۔
