DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
بلی نمبر: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ایک endodeoxyribonuclease ہے جو سنگل یا ڈبل پھنسے ہوئے DNA کو ہضم کر سکتا ہے۔یہ 5'-ٹرمینل پر فاسفیٹ گروپس اور 3'-ٹرمینل پر ہائیڈروکسیل کے ساتھ مونوڈو آکسینیوکلیوٹائڈس یا سنگل یا ڈبل سٹرینڈڈ اولیگوڈیوکسینیوکلیوٹائڈس تیار کرنے کے لیے فاسفوڈیسٹر بانڈز کو پہچانتا اور ان کو توڑتا ہے۔DNase I کی سرگرمی Ca پر منحصر ہے۔2+اور متضاد دھاتی آئنوں جیسے Mn کے ذریعہ چالو کیا جاسکتا ہے۔2+اور Zn2+.5 ایم ایم Ca2+انزائم کو ہائیڈولیسس سے بچاتا ہے۔ایم جی کی موجودگی میں2+، انزائم تصادفی طور پر ڈی این اے کے کسی بھی اسٹرینڈ پر کسی بھی سائٹ کو پہچان سکتا ہے اور اسے صاف کرسکتا ہے۔ایم این کی موجودگی میں2+، ڈی این اے کے دوہرے کناروں کو بیک وقت پہچانا جا سکتا ہے اور تقریباً ایک ہی جگہ پر کلیو کیا جا سکتا ہے تاکہ فلیٹ اینڈ ڈی این اے کے ٹکڑے یا چپکنے والے سرے والے ڈی این اے کے ٹکڑے 1-2 نیوکلیوٹائڈز پھیلے ہوئے ہوں۔
اجزاء
| نام | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I، RNase فری | 20μL | 200μL | 1 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
| 10×DNase I بفر | 1 ملی لیٹر | 1 ملی لیٹر | 5 × 1 ملی لیٹر | 5 × 10 ملی لیٹر |
ذخیرہ کرنے کے حالات
اسٹوریج کے لیے -25℃~-15℃؛آئس پیک کے تحت نقل و حمل۔
ہدایات
1. ذیل میں درج تناسب کے مطابق RNase فری ٹیوب میں رد عمل کا حل تیار کریں:
| جزو | حجم |
| آر این اے | X µg |
| 10 × DNase I بفر | 1μL |
| DNase I، RNase فری (5U/μL) | 1 U فی µg RNA① |
| ڈی ڈی ایچ2O | 10μL تک |
نوٹ: ① DNase I کے حجم کا حساب لگائیں جسے RNA کی مقدار کی بنیاد پر شامل کرنے کی ضرورت ہے۔
2. 15 منٹ کے لیے 37 ℃؛
3. 2.5mM~5mM کے حتمی ارتکاز میں 0.5M EDTA شامل کریں، اور رد عمل کو روکنے کے لیے 10 منٹ کے لیے 65℃ پر گرم کریں۔نمونہ براہ راست اگلے رد عمل کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے جیسے کہ ریورس ٹرانسکرپشنتجربہ
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ کو انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے جو pBR322 کے 1µg کو مکمل طور پر کم کر دے گا۔ڈی این اے 10 منٹ میں 37 ℃ پر۔
کوالٹی کنٹرول
RNase:DNase I کا 5U 1.6µg MS2 RNA کے ساتھ 37℃ پر 4 گھنٹے تک کوئی انحطاط پیدا نہیں کرتاایگروز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ طے کیا جاتا ہے۔
نوٹس
1. براہ کرم خود سے 0.5MEDTA تیار کریں۔
2. RNA کے فی µg 1U DNase I استعمال کریں۔تاہم، اگر RNA 1µg سے کم ہے، تو براہ کرم 1U DNase I استعمال کریں۔
3. براہ کرم آپریشن کے دوران انزائم کو برف پر رکھیں۔
