سپر اسٹارٹ کیو پی سی آر پریمکس پلس-یو این جی
بلی نمبر: HCB5071E
سپر اسٹارٹ کیو پی سی آر پریمکس پلس-یو این جی ایک خصوصی ریجنٹ ہے جو ریئل ٹائم پی سی آر کوالٹیٹیو اور مقداری رد عمل کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے جو پروب پر مبنی ڈٹیکشن کا استعمال کرتے ہوئے، خاص طور پر لائو فلائزیشن کے عمل کے لیے تیار کیا گیا ہے۔اس میں ایک نیا ہاٹ اسٹارٹ انزائم ہاٹ اسٹارٹ ٹاک پلس (DG) ہے، جس میں اس کی Taq انزائم کی سرگرمی کمرے کے درجہ حرارت پر بند ہوتی ہے، جو کم درجہ حرارت کے حالات میں پرائمر کی غیر مخصوص اینیلنگ یا پرائمر ڈائمر کی تشکیل کی وجہ سے ہونے والے غیر مخصوص ایمپلیفیکیشن کو مؤثر طریقے سے روکتا ہے، اس طرح بہتر ہوتا ہے۔ امپلیفیکیشن رد عمل کی خصوصیت۔یہ ریجنٹ تیز رفتار گرم آغاز حاصل کرنے کے لیے ایک بہترین qPCR مخصوص بفر اور UNG/dUTP اینٹی آلودگی نظام کا استعمال کرتا ہے، جس سے کیو پی سی آر کے رد عمل کی کارکردگی اور حساسیت میں بہت بہتری آتی ہے۔یہ مقداری علاقوں کی ایک وسیع رینج میں اچھے معیاری منحنی خطوط حاصل کر سکتا ہے اور درست طریقے سے مقدار کا تعین کر سکتا ہے، جس سے پی سی آر کی بقایا مصنوعات یا ایروسول آلودگی کی وجہ سے ہونے والی غلط مثبت پرورش کو مؤثر طریقے سے روکا جا سکتا ہے۔یہ ریجنٹ زیادہ تر فلوروسینٹ مقداری PCR آلات کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے جیسے کہ اپلائیڈ بایو سسٹمز، ایپینڈورف، بایو-راڈ اور روشے وغیرہ، اور لائوفائیلائزڈ شکل میں اچھی استحکام کی نمائش کرتا ہے۔
ریجنٹ کی ترکیب
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+مفت) (ڈی جی)
2. 250 ایم ایم ایم جی سی ایل2
3. 4× لائیو پروٹیکٹنٹ (اختیاری)
ذخیرہ کرنے کی شرائط
-20℃ پر طویل مدتی اسٹوریج؛4℃ پر 3 ماہ تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔استعمال سے پہلے اچھی طرح مکس کریں اوربار بار جمنے اور پگھلنے سے بچیں۔
سائیکلنگ پروٹوکول
طریقہ کار | درجہ حرارت | وقت | سائیکل |
ہاضمہ | 50℃ | 2 منٹ | 1 |
پولیمریز ایکٹیویشن | 95℃ | 1~5 منٹ | 1 |
ڈینیچر | 95℃ | 10~20 سیکنڈ | 40-50 |
اینیلنگ اور توسیع | 56~64℃ | 20~60 سیکنڈ | 40-50 |
qPCR مائع رد عمل Syتنے کی تیاری
کمپوزیشن |
25µL والیوم |
50µL والیوم |
حتمی ارتکاز |
5×HotstartPremix پلس-UNG(ایم جی2+مفت) (ڈی جی) | 5µL | 10µL | 1× |
250 ایم ایم ایم جی سی ایل2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 ایم ایم |
4 × لائیو پروٹیکٹنٹ1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
25×پرائمر پروب مکس2 | 1µL | 2µL | 1× |
ٹیمپلیٹ ڈی این اے3 | —— | —— | —— |
ڈی ڈی ایچ2O | 25µL تک | 50µL تک | —— |
1. پرائمر کے لیے 0.2μM کی حتمی حراستی عام طور پر اچھے نتائج دیتی ہے۔جب رد عمل کی کارکردگی خراب ہو تو، ضرورت کے مطابق 0.2-1μM کی حد کے اندر پرائمر کی حراستی کو ایڈجسٹ کریں۔جانچ کے ارتکاز کو عام طور پر 0.1-0.3μM کی حد کے اندر بہتر بنایا جاتا ہے تاکہ بہترین امتزاج تلاش کیا جا سکے۔
2. مختلف قسم کے سانچوں میں موجود ہدف جینز کی کاپی نمبر مختلف ہوتی ہے۔اگر ضروری ہو تو، زیادہ سے زیادہ ٹیمپلیٹ کے اضافے کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے تدریجی کمزوری کی جا سکتی ہے۔
3. یہ نظام lyophilized کیا جا سکتا ہے؛جب گاہک اس سسٹم کو منجمد خشک کرنے کی ضروریات کے بغیر استعمال کرتے ہیں، تو 4×لائیو پروٹیکٹنٹ کو منتخب طور پر شامل کیا جا سکتا ہے؛ اگر مائع ری ایجنٹس کے مرحلے میں مصنوعات کی کارکردگی کی توثیق کے دوران منجمد خشک مصنوعات کی ضرورت ہو، تو اسے لائو فلائزڈ سسٹم کے اجزاء کے ساتھ مستقل مزاجی کو یقینی بنانے کے لیے 4×لائیو پروٹیکٹنٹ کا اضافہ کرنا چاہیے۔ اور اثرات.
جب سسٹم استعمال ہوتا ہے۔d منجمد خشک کرنے کے لئے، تیار کریں نظام as درج ذیل:
کمپوزیشن | 25µL ری ایکشن سسٹم |
5 × ہاٹ اسٹارٹ پریمکس پلس-یو این جی (ایم جی2+مفت) (ڈی جی) | 5µL |
250 ایم ایم ایم جی سی ایل2 | 0.45µL |
4 × لائیو پروٹیکٹنٹ | 6.25µL |
25×پرائمر پروب مکس | 1µL |
ڈی ڈی ایچ2O | 18~20µL تک |
* اگر منجمد خشک کرنے کے لئے دوسرے نظاموں کی ضرورت ہو تو، براہ کرم الگ سے مشورہ کریں۔
لائوفیلائزیشن کا عملss
طریقہ کار | درجہ حرارت | وقت | حالت | دباؤ |
پری منجمد کرنا | 4℃ | 30 منٹ | پکڑو |
1 اے ٹی ایم |
-50℃ | 60 منٹ | کولنگ | ||
-50℃ | 180 منٹ | پکڑو | ||
پرائمری خشک کرنا | -30℃ | 60 منٹ | ہیٹنگ |
الٹیمیٹ ویکیوم |
-30℃ | 70 منٹ | پکڑو | ||
ثانوی خشک کرنا | 25℃ | 60 منٹ | ہیٹنگ |
الٹیمیٹ ویکیوم |
25℃ | 300 منٹ | پکڑو |
2. مندرجہ بالا لائوفیلائزیشن کا عمل صرف حوالہ کے لیے ہے۔مختلف مصنوعات کی اقسام اور مختلف منجمد خشک کرنے والے مختلف پیرامیٹرز ہیں، لہذا ایڈجسٹمنٹ اصل کے مطابق کی جا سکتی ہیںاستعمال کے دوران حالات.
3. مختلف لائوفائیلائزیشن کے عمل مختلف بیچ سائز کے لائوفلائزڈ کے لیے موزوں ہو سکتے ہیںمصنوعات، لہذا بڑے پیمانے پر پیداوار کے لیے استعمال ہونے پر کافی جانچ کی توثیق کی جانی چاہیے۔
لائوفیلائز استعمال کرنے کی ہدایاتڈی پاؤڈر
1. لیوفیلائزڈ پاؤڈر کو مختصر طور پر سینٹری فیوج کریں؛
2. لائو فلائزڈ پاؤڈر میں نیوکلک ایسڈ ٹیمپلیٹ شامل کریں اور 25µL تک پانی شامل کریں۔
3. سینٹرفیوگریشن کے ذریعے اچھی طرح مکس کریں اور مشین پر چلائیں۔
کوالٹی کنٹرول:
1. فنکشنل ٹیسٹنگ: کیو پی سی آر کی حساسیت، مخصوصیت، تولیدی صلاحیت۔
2. کوئی خارجی نیوکلیز سرگرمی نہیں، کوئی خارجی اینڈو/ایگزونوکلیز آلودگی نہیں۔
تکنیکی معلومات:
1. سپر اسٹارٹ کیو پی سی آر پریمکس پلس-یو این جی ایک نئے ہاٹ اسٹارٹ انزائم کا استعمال کرتا ہے جو 1~5 منٹ کے اندر تیزی سے ہاٹ اسٹارٹ کرنے کے قابل بناتا ہے۔خصوصی بفر فارمولیشن کے ذریعے یہ ملٹی پلیکس فلوروسینٹ مقداری PCR رد عمل کے لیے موزوں ہے۔
2. اس میں اعلی خصوصیت ہے جو فلوروسینس مقداری پی سی آر کی حد کا پتہ لگانے کی حساسیت کو نمایاں طور پر بہتر بناتی ہے، ایمپلیفیکیشن منحنی خطوط کو معمول پر لاتی ہے، فلوروسینس ویلیو کم ارتکاز کے سانچوں پر واضح بہتری حاصل کرتی ہے، جو کہ اعلی حساسیت فلوروسینس مقداری PCR کا پتہ لگانے والے ری ایجنٹس کے طور پر موزوں ہے۔
3. کم اینیلنگ درجہ حرارت یا 200bp سے زیادہ لمبے پرائمر کے لیے، 3 قدمی طریقہ تجویز کیا جاتا ہے۔
4. dUTP کے استعمال کی کارکردگی اور UNG انزائم کی حساسیت مختلف ٹارگٹ جینز کے لیے مختلف ہوتی ہے، اس طرح اگر UNG سسٹم کا استعمال پتہ لگانے کی حساسیت میں کمی کا باعث بنتا ہے، تو رد عمل کے نظام کو ایڈجسٹ اور بہتر بنایا جانا چاہیے۔اگر تکنیکی مدد کی ضرورت ہو تو براہ کرم ہماری کمپنی سے رابطہ کریں۔
5. ایمپلیفیکیشن سے پہلے اور بعد میں مخصوص جگہوں اور پائپٹس کا استعمال کریں، آپریشن کے دوران دستانے پہنیں اور انہیں کثرت سے تبدیل کریں۔پی سی آر کی تکمیل کے بعد ری ایکشن ٹیوب نہ کھولیں تاکہ پی سی آر مصنوعات کے نمونوں کی آلودگی کو کم سے کم کیا جا سکے۔