ڈی نیس آئی
DNase I (Deoxyribonuclease I) ایک endodeoxyribonuclease ہے جو سنگل یا ڈبل پھنسے ہوئے DNA کو ہضم کر سکتا ہے۔یہ 5′-ٹرمینل پر فاسفیٹ گروپس کے ساتھ monodeoxynucleotides یا single- یا double-stranded oligodeoxynucleotides اور 3′-ٹرمینل پر ہائیڈروکسیل پیدا کرنے کے لیے فاسفوڈیسٹر بانڈز کو پہچانتا اور ان کو توڑتا ہے۔DNase I کی سرگرمی Ca2+ پر منحصر ہے اور اسے Mn2+ اور Zn2+ جیسے متضاد دھاتی آئنوں سے چالو کیا جا سکتا ہے۔5mM Ca2+ انزائم کو ہائیڈولیسس سے بچاتا ہے۔Mg2+ کی موجودگی میں، انزائم تصادفی طور پر DNA کے کسی بھی اسٹرینڈ پر کسی بھی جگہ کو پہچان سکتا ہے اور اسے صاف کر سکتا ہے۔Mn2+ کی موجودگی میں، ڈی این اے کے دوہرے کناروں کو بیک وقت پہچانا جا سکتا ہے اور تقریباً ایک ہی جگہ پر کلیو کیا جا سکتا ہے تاکہ 1-2 نیوکلیوٹائڈز پھیلے ہوئے فلیٹ اینڈ ڈی این اے کے ٹکڑے یا چپکنے والے ڈی این اے کے ٹکڑے بن سکیں۔
پروڈکٹ پراپرٹی
بوائین لبلبہ DNase I کا اظہار خمیر کے اظہار کے نظام میں کیا گیا تھا اور اسے صاف کیا گیا تھا۔
Cاجزاء
| جزو | حجم | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I، RNase فری | 20μL | 200μL | 1 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
| 10×DNase I بفر | 1 ملی لیٹر | 1 ملی لیٹر | 5 × 1 ملی لیٹر | 5 × 10 ملی لیٹر |
نقل و حمل اور اسٹوریج
1. سٹوریج کا استحکام: - سٹوریج کے لیے 15℃~-25℃؛
2. ٹرانسپورٹ استحکام: آئس پیک کے تحت نقل و حمل؛
3. فراہم کردہ: 10 mM Tris-HCl، 2 mM CaCl2، 50% گلیسرول، پی ایچ 7.6 25℃ پر۔
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ کو انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے جو 37 ° C پر 10 منٹ میں 1 µg pBR322 DNA کو مکمل طور پر کم کر دے گا۔
کوالٹی کنٹرول
RNase:DNase I کا 5U 1.6 μg MS2 RNA کے ساتھ 37 ℃ پر 4 گھنٹے تک کوئی انحطاط نہیں دیتا جیسا کہ ایگرز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے طے کیا جاتا ہے۔
بیکٹیریل اینڈوٹوکسین:LAL-ٹیسٹ، چینی فارماکوپیا IV 2020 ایڈیشن کے مطابق، جیل کی حد ٹیسٹ کا طریقہ، عام اصول (1143)۔بیکٹیریل اینڈوٹوکسن کا مواد ≤10 EU/mg ہونا چاہیے۔
ہدایات براے استعمال
1. ذیل میں درج تناسب کے مطابق RNase فری ٹیوب میں رد عمل کا حل تیار کریں:
| جزو | حجم |
| آر این اے | X μg |
| 10 × DNase I بفر | 1 μL |
| DNase I، RNase فری (5U/μL) | 1 U فی μg RNA |
| ڈی ڈی ایچ2O | 10 μL تک |
2.37 ℃ 15 منٹ کے لیے؛
3. رد عمل کو روکنے کے لیے ٹرمینیشن بفر کو شامل کریں، اور DNase I کو غیر فعال کرنے کے لیے 10 منٹ کے لیے 65℃ پر گرم کریں۔ نمونے کو براہ راست ٹرانسکرپشن کے اگلے تجربے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
نوٹس
1. 1U DNase I فی μg RNA، یا 1U DNase I 1μg RNA سے کم کے لیے استعمال کریں۔
2. EDTA کو 5 mM کے حتمی ارتکاز میں شامل کیا جانا چاہیے تاکہ RNA کو انزائم کے غیر فعال ہونے کے دوران انحطاط سے بچایا جا سکے۔
