فاسفیٹیس الکلائن (ALP)
تفصیل
الکلائن فاسفیٹیس ایک ریکومبیننٹ ای کولی سٹرین سے ماخوذ ہے جو TAB5 جین رکھتا ہے۔انزائم ڈی این اے اور آر این اے فاسفومونوسٹرس کے 5' اور 3' سروں کے ڈیفاسفوریلیشن کو اتپریرک کرتا ہے۔نیز، یہ رائبوز کو ہائیڈولائز کرتا ہے، نیز ڈیوکسائریبونوکلیوسائیڈ ٹرائی فاسفیٹس (NTPs اور dNTPs)۔ٹی اے بی 5 الکلائن فاسفیٹیز 5'' پھیلے ہوئے، 5'' پیچھے اور کند سروں پر کام کرتا ہے۔فاسفیٹیس کو کئی مالیکیولر بائیولوجی ایپلی کیشنز میں استعمال کیا جا سکتا ہے، جیسے ڈی این اے یا آر این اے کے فاسفوریلیٹڈ سروں کو ہٹانے کے لیے کلوننگ یا پروب اینڈ لیبلنگ۔کلوننگ کے تجربات میں، ڈیفاسفوریلیشن لکیری پلاسمڈ ڈی این اے کو سیلف لیگیشن سے روکتا ہے۔یہ ڈی این اے کی ترتیب کے لیے ٹیمپلیٹ تیار کرنے کے لیے پی سی آر کے رد عمل میں غیر مربوط ڈی این ٹی پیز کو بھی کم کر سکتا ہے۔5 منٹ کے لیے 70 ° C پر گرم کرنے سے انزائم مکمل طور پر اور ناقابل واپسی طور پر غیر فعال ہو جاتا ہے، اس طرح فاسفیٹیس کو ligation سے پہلے ہٹانا یا غیر ضروری لیبل لگانا ختم ہو جاتا ہے۔
استعمال
1. Alkaline phosphatase پروٹین کے ساتھ مل کر (اینٹی باڈیز، streptavidin وغیرہ) خاص طور پر ہدف کے مالیکیولز کی شناخت کر سکتا ہے، اور ELISA، WB اور ہسٹو کیمیکل پتہ لگانے میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔
2. Alkaline phosphatase کا استعمال DNA یا RNA کے 5'-ٹرمینل کو ڈیفاسفورائز کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے تاکہ خود کو جوڑنے سے روکا جا سکے۔
3. مندرجہ بالا ڈیفاسفوریلیڈ ڈی این اے یا آر این اے کو ریڈیو لیبل والے فاسفیٹس (T4 پولی نیوکلیوٹائڈ کناز کے ذریعے) کے ذریعے لیبل کیا جا سکتا ہے۔
کیمیائی ساخت
تفصیلات
ٹیسٹ آئٹمز | وضاحتیں |
انزائم کی سرگرمی | 5U/μL |
اینڈونکلیز سرگرمی | پتہ نہیں چلا |
Exonuuclease سرگرمی | پتہ نہیں چلا |
نکنگ سرگرمی | پتہ نہیں چلا |
RNase سرگرمی | پتہ نہیں چلا |
ای کولی ڈی این اے | ≤1copy/5U |
اینڈوٹوکسن | LAL-ٹیسٹ، ≤10EU/mg |
طہارت | ≥95% |
نقل و حمل اور اسٹوریج
نقل و حمل:محیط
ذخیرہ:2-8 ° C پر اسٹور کریں۔
تجویز کردہ دوبارہ ٹیسٹزندگی:2 سال