الٹرا نیوکلیز
الٹرا نیوکلیز ایک جینیاتی طور پر انجینئرڈ ڈینڈونکلیز ہے جو Serratia marcescens سے ماخوذ ہے، جو DNA یا RNA، یا تو ڈبل یا سنگل سٹرینڈڈ، لکیری یا سرکلر، وسیع رینج کے تحت نیوکلک ایسڈ کو مکمل طور پر 5'-monophosphate oligonseba-3 کے ساتھ انحطاط کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ .جینیاتی انجینئرنگ میں ترمیم کے بعد، پروڈکٹ کو Escherichia coli (E. coli) میں خمیر، اظہار اور پیوریفائیڈ کیا گیا، جس سے سیل سپرنٹنٹ اور سیل لیسیٹ سائنسی تحقیق کی viscosity کو کم کیا جاتا ہے، بلکہ پروٹین کی صفائی کی کارکردگی اور فعال تحقیق کو بھی بہتر بنایا جاتا ہے۔اسے جین تھراپی، وائرس پیوریفیکیشن، ویکسین کی تیاری، پروٹین اور پولی سیکرائیڈ فارماسیوٹیکل انڈسٹری میں میزبان باقیات نیوکلک ایسڈ کو ہٹانے والے ری ایجنٹ کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔
مصنوعات کی خصوصیات
| CAS نمبر | 9025-65-4 |
| ای سی نمبر | |
| سالماتی وزن | 30kDa |
| آئیسو الیکٹرک پوائنٹ | 6.85 |
| پروٹین کی پاکیزگی | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| مخصوص سرگرمی | ≥1۔1×106U/mg |
| زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت | 37°C |
| بہترین پی ایچ | 8.0 |
| پروٹیز سرگرمی | منفی |
| بائیو برڈن | ~10CFU/100,000U |
| بقایا میزبان سیل پروٹین | ≤10ppm |
| بھاری دھات | ≤10ppm |
| بیکٹیریل اینڈوٹوکسین | ~0.25EU/1000U |
| اسٹوریج بفر | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl، 50٪ گلیسرول |
ذخیرہ کرنے کے حالات
≤0°C ٹرانسپورٹیشن；-25~-15°C اسٹوریج，2 سال کی میعاد (جمنے سے پگھلنے سے بچیں)۔
یونٹ کی تعریف
37 °C پر 30 منٹ کے اندر △A260 کی جذب قدر کو 1.0 سے تبدیل کرنے کے لیے استعمال ہونے والے انزائم کی مقدار، pH 8.0، جو 37μg سالمن سپرم ڈی این اے کے مساوی ہے جو oligonucleotides میں کاٹ کر ایک فعال یونٹ (U) کے طور پر بیان کی گئی تھی۔
کوالٹی کنٹرول
بقایا میزبان سیل پروٹین: ایلیسا کٹ
•پروٹیز باقیات: 250KU/mL الٹرا نیوکلیز نے 60 منٹ تک سبسٹریٹ کے ساتھ رد عمل ظاہر کیا، کوئی سرگرمی نہیں پائی گئی۔
•بیکٹیریل اینڈوٹوکسین: LAL-Test, Pharmacopoia of the People's Republic of China والیم 4 (2020 ایڈیشن) جیل کی حد ٹیسٹ کا طریقہ۔عمومی قواعد (1143)۔
•حیاتیاتی بوجھ: عوامی جمہوریہ چین کا فارماکوپیا جلد 4 (2020 ایڈیشن) — جنرل
سٹرلٹی ٹیسٹ کے قواعد (1101)، پی آر سی نیشنل اسٹینڈرڈ، جی بی 4789.2-2016۔
•بھاری دھات:ICP-AES، HJ776-2015۔
آپریشن
الٹرا نیوکلیز سرگرمی کو نمایاں طور پر روک دیا گیا تھا جب SDS کا ارتکاز 0.1٪ یا EDTA سے زیادہ تھا۔
ارتکاز 1mM سے زیادہ تھا۔ سرفیکٹنٹ ٹرائٹن X-100، Tween 20 اور Tween 80 کا نیوکلیز پر کوئی اثر نہیں ہوا۔
خصوصیات جب ارتکاز 1.5% سے کم تھا۔
| آپریشن | بہترین آپریشن | درست آپریشن |
| درجہ حرارت | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 ملی میٹر | 1-15 ملی میٹر |
| ڈی ٹی ٹی | 0-100mm | >100 ملی میٹر |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100mm | >100 ملی میٹر |
| مونوولینٹ دھاتی آئن (Na+، K+ وغیرہ) | 0-20mm | 0-200mm |
| PO43- | 0-10 ملی میٹر | 0-100mm |
استعمال اور خوراک
• ویکسین کی مصنوعات سے خارجی نیوکلک ایسڈ کو ہٹا دیں، بقایا نیوکلک ایسڈ زہریلا ہونے کے خطرے کو کم کریں اور مصنوعات کی حفاظت کو بہتر بنائیں۔
• نیوکلک ایسڈ کی وجہ سے فیڈ مائع کی viscosity کو کم کریں، پروسیسنگ کا وقت کم کریں اور پروٹین کی پیداوار میں اضافہ کریں۔
• نیوکلک ایسڈ کو ہٹا دیں جس نے ذرہ لپیٹ رکھا ہے (وائرس، انکلوژن باڈی، وغیرہ)، جو سازگار ہے۔
ذرہ کی رہائی اور طہارت کے لیے۔
| تجرباتی قسم | پروٹین کی پیداوار | وائرس، ویکسین | سیل ڈرگز |
| سیل نمبر | 1 جی سیل گیلا وزن (10ml بفر کے ساتھ دوبارہ معطل) | 1L ابال مائع سپرنٹنٹ | 1L ثقافت |
| کم از کم خوراک | 250U | 100U | 100U |
| تجویز کردہ خوراک | 2500U | 25000U | 5000U |
• نیوکلیز کا علاج کالم کرومیٹوگرافی، الیکٹروفورسس اور بلوٹنگ تجزیہ کے لیے نمونے کی ریزولوشن اور بازیافت کو بہتر بنا سکتا ہے۔
• جین تھراپی میں، نیوکلک ایسڈ کو پاکیزہ ایڈینو سے وابستہ وائرس حاصل کرنے کے لیے ہٹا دیا جاتا ہے۔
