سی ایچ او ایچ سی پی ایلیسا کٹ
اس پرکھ میں ایک قدمی امیونوسوربینٹ ELISA طریقہ استعمال کیا جاتا ہے۔CHOK1 HCP پر مشتمل نمونے بیک وقت HRP لیبل والے بکرے کے اینٹی CHOK1 اینٹی باڈی اور اینٹی CHOK1 اینٹی باڈی کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتے ہیں جو ELISA پلیٹ پر لیپت ہوتے ہیں، آخر کار ٹھوس مرحلے کے اینٹی باڈی-HCP-لیبل والے اینٹی باڈی کا ایک سینڈوچ کمپلیکس تشکیل دیتے ہیں۔غیر پابند اینٹیجن اینٹی باڈی کو ELISA پلیٹ کو دھو کر ہٹایا جا سکتا ہے۔ٹی ایم بی سبسٹریٹ کو کافی ردعمل کے لیے کنویں میں شامل کیا جاتا ہے۔اسٹاپ سلوشن کو شامل کرنے کے بعد رنگ کی نشوونما روک دی جاتی ہے، اور 450/650nm پر رد عمل کے حل کی OD یا جاذبیت کی قدر کو مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ پڑھا جاتا ہے۔OD قدر یا جاذبیت کی قدر حل میں HCP مواد کے متناسب ہے۔اس سے، حل میں HCP ارتکاز کو معیاری وکر کے مطابق شمار کیا جا سکتا ہے۔
درخواست
اس کٹ کا استعمال نمونوں میں CHOK1 میزبان سیل پروٹین کی باقیات کے مواد کو مقداری طور پر معلوم کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔
Cاجزاء
S/N | جزو | توجہ مرکوز کرنا | ذخیرہ کرنے کی شرائط |
1 | CHOK1 HCP سٹینڈرڈ | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
2 | اینٹی CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃، روشنی سے بچائیں۔ |
3 | ٹی ایم بی | NA | 2-8℃، روشنی سے بچاؤ |
4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
5 | حل بند کرو | NA | RT |
6 | مائیکرو پلیٹ سیلرز | NA | RT |
7 | بی ایس اے | NA | 2-8℃ |
8 | اعلی جذب پری کوٹنگ پلیٹیں | NA | 2-8℃ |
سامان درکار ہے۔
استعمال کی اشیاء/سامان | مینوفیکچرنگ | تفصیلی فہر ست |
مائیکرو پلیٹ ریڈر | مالیکیولر ڈیوائسز | سپیکٹرا میکس M5، M5e، یا مساوی |
تھرمو مکسر | ایپنڈورف | Eppendorf/5355، یا مساوی |
ورٹیکس مکسر | آئی کے اے | MS3 ڈیجیٹل، یا اس کے مساوی |
اسٹوریج اور استحکام
1.-25~-15°C پر نقل و حمل۔
2.سٹوریج کے حالات جیسا کہ جدول 1 میں دکھایا گیا ہے۔اجزاء 1-2 ذخیرہ کیے جاتے ہیں ≤–20°C،5-6 ذخیرہ کیے جاتے ہیں RT،3、4、7、8 2-8℃ پر ذخیرہ کیا جاتا ہے۔میعاد کی مدت 12 ماہ ہے۔
پروڈکٹ کے پیرامیٹرز
1.حساسیت: 1 این جی / ایم ایل
2.پتہ لگانے کی حد: 3-100ng/mL
3۔درستگی: انٹرا پرکھ CV≤ 10%، انٹرا-اسے CV≤ 15%
4.HCP کوریج: >80%
5۔خصوصیت: یہ کٹ آفاقی ہے کیونکہ یہ خاص طور پر CHOK1 HCP کے ساتھ پاکیزگی کے عمل سے آزاد ہے۔
ریجنٹ کی تیاری
1۔PBST 0.05%
15 ملی لیٹر 20×PBST 0.05% لیں، ddH میں پتلا2O، اور 300 ملی لیٹر تک بنایا گیا ہے۔
2.1.0% BSA
بوتل سے 1 گرام BSA لیں اور PBST 0.05% کے 100 ملی لیٹر میں پتلا کریں، مکمل طور پر تحلیل ہونے تک اچھی طرح مکس کریں، اور 2-8 ° C پر محفوظ کریں۔تیار شدہ ڈائلیشن بفر 7 دنوں کے لیے درست ہے۔ضرورت کے مطابق تیار کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
3۔پتہ لگانے کا حل 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP کا 48μL لیں اور 1% BSA کے 11,952μL میں پتلا کریں تاکہ 2μg/mL کا پتہ لگانے والے حل کی حتمی حراستی حاصل کریں۔
4.QC اور CHOK1 HCP معیارات کی تیاری
نالی نہیں. | اصل | توجہ مرکوز کرنا | حجم | 1%BSA | مکمل حجم | فائنل |
A | معیاری | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
جدول: QC اور معیارات کی تیاری
پرکھ کا طریقہ کار
1۔ری ایجنٹس تیار کریں جیسا کہ اوپر "ریجنٹ تیاری" میں اشارہ کیا گیا ہے۔
2.ہر کنویں میں 50μL معیارات، نمونے اور QCs (ٹیبل 3 دیکھیں) لیں، پھر 100μL کا پتہ لگانے والے حل (2μg/mL) شامل کریں۔پلیٹ کو سیلر سے ڈھانپیں، اور ELISA پلیٹ کو تھرمو مکسر پر رکھیں۔500rpm، 25±3℃ پر 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کریں۔
3۔سنک میں مائکروپلیٹ کو الٹ دیں اور کوٹنگ سلوشن کو ضائع کریں۔ELISA پلیٹ کو دھونے اور محلول کو ضائع کرنے کے لیے PBST 0.05% کا 300μL ہر کنویں میں ڈالیں، اور دھونے کو 3 بار دہرائیں۔پلیٹ کو صاف کاغذ کے تولیے پر الٹ دیں اور تھپکی سے خشک کریں۔
4.ہر کنویں میں TMB سبسٹریٹ کا 100μL (ٹیبل 1 دیکھیں) شامل کریں، ELISA پلیٹ کو سیل کریں، اور اندھیرے میں 25±3℃ پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
5۔ہر کنویں میں 100μL سٹاپ محلول کا پائپیٹ کریں۔
6۔مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ 450/650nm کی طول موج پر جذب کی پیمائش کریں۔
7۔سافٹ میکس یا مساوی سافٹ ویئر کے ذریعے ڈیٹا کا تجزیہ کریں۔چار پیرامیٹر لاجسٹک ریگریشن ماڈل کا استعمال کرکے معیاری وکر پلاٹ کریں۔
معیاری وکر کی مثال
نوٹ: اگر نمونے میں HCP کا ارتکاز معیاری منحنی خطوط کی بالائی حد سے زیادہ ہے، تو جانچ سے پہلے اسے dilution buffer کے ساتھ مناسب طریقے سے پتلا کرنے کی ضرورت ہے۔
نوٹس
سٹاپ حل 2M سلفیورک ایسڈ ہے، براہ کرم چھڑکنے سے بچنے کے لئے احتیاط سے ہینڈل کریں!