گرم آغاز Bst 2.0 DNA پولیمریز (گلیسرول سے پاک)
Bst DNA پولیمریز V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I سے ماخوذ ہے، جس میں 5′→3′ DNA پولیمریز کی سرگرمی اور مضبوط چین کی تبدیلی کی سرگرمی ہے، لیکن کوئی 5′→3′ exonuclease سرگرمی نہیں ہے۔Bst DNA Polymerase V2 اسٹرینڈ ڈسپلیسمنٹ، آئیسو تھرمل ایمپلیفیکیشن LAMP (لوپ میڈیٹیڈ آئیسو تھرمل ایمپلیفیکیشن) اور تیز ترتیب کے لیے مثالی طور پر موزوں ہے۔Bst DNA پولیمریز V2 ایک ہاٹ سٹارٹ ورژن ہے جو Bst DNA پولیمریز V2 (HC5005A) پر مبنی ہے جو ریورس ایبل موڈیفیکیشن ٹیکنالوجی کے ذریعے حاصل کیا گیا ہے، جو کمرے کے درجہ حرارت پر DNA پولیمریز کی سرگرمی کو روک سکتا ہے، لہذا رد عمل کے نظام کو کمرے کے درجہ حرارت پر چلایا جا سکتا ہے اور تیار کیا جا سکتا ہے۔ مخصوص پروردن اور رد عمل کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے، اور اس ورژن کو لائوفائیلائز کیا جا سکتا ہے۔اس کے علاوہ، اس کی سرگرمی اعلی درجہ حرارت پر جاری کی جاتی ہے، لہذا علیحدہ ایکٹیویشن مرحلے کی ضرورت نہیں ہے۔
اجزاء
| جزو | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA پولیمریز V2 (گلیسرول سے پاک) (8U/μL) | 0.2 ملی لیٹر | 1 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
| 10×HC Bst V2 بفر | 1.5 ملی لیٹر | 2×1.5 ملی لیٹر | 3×10 ملی لیٹر |
| ایم جی ایس او4(100mm) | 1.5 ملی لیٹر | 2×1.5 ملی لیٹر | 2 × 10 ملی لیٹر |
درخواستیں
1.LAMP isothermal amplification
2.ڈی این اے اسٹرینڈ واحد نقل مکانی کا رد عمل
3.اعلی جی سی جین کی ترتیب
4.نینوگرام کی سطح کی ڈی این اے کی ترتیب۔
اسٹوریج کی حالت
نقل و حمل 0°C سے کم اور -25°C~-15°C پر ذخیرہ کیا جائے۔
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ کو انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا جاتا ہے جو 65 ° C پر 30 منٹ میں 25 nmol dNTP کو تیزاب میں حل نہ ہونے والے مواد میں شامل کرتا ہے۔
کوالٹی کنٹرول
1.پروٹین پیوریٹی پرکھ (SDS-PAGE):Bst DNA پولیمریز V2 کی پاکیزگی کا تعین ≥99% SDS-PAGE تجزیہ سے Coomassie Blue detection کے ذریعے ہوتا ہے۔
2.Endonucleaseسرگرمی:37 ℃ پر 16 گھنٹے تک 1 μg λDNA کے ساتھ Bst DNA پولیمریز V2 کے کم از کم 8 U پر مشتمل 50 μL رد عمل کے انکیوبیشن کے نتیجے میں تعین کے مطابق کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوتا ہے۔
3.Exonuclease سرگرمی:1 μg λ -ہند Ⅲ ڈائجسٹ DNA کے ساتھ 37 ℃ پر 16 گھنٹے تک Bst DNA پولیمریز V2 کے کم از کم 8 U پر مشتمل 50 μL رد عمل کے انکیوبیشن کے نتیجے میں تعین کے مطابق کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوتا ہے۔
4.نکیس سرگرمی:37°C پر 16 گھنٹے تک 1 μg pBR322 DNA کے ساتھ Bst DNA پولیمریز V2 کے کم از کم 8 U پر مشتمل 50 μL رد عمل کے انکیوبیشن کے نتیجے میں تعین کے مطابق کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوتا ہے۔
5.RNase سرگرمی:1.6 μg MS2 RNA کے ساتھ کم از کم 8 U Bst DNA پولیمریز V2 پر مشتمل 50 μL رد عمل کو 37°C پر 16 گھنٹے تک انکیوبیشن کے نتیجے میں تعین کے مطابق کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوتا ہے۔
6.ای کولیڈی این اے:Bst DNA پولیمریز V2 کے 120 U کو E. coli 16S rRNA لوکس کے لیے مخصوص پرائمر کے ساتھ TaqMan qPCR کا استعمال کرتے ہوئے E. coli جینومک DNA کی موجودگی کے لیے اسکرین کیا گیا ہے۔ای کولی جینومک ڈی این اے آلودگی ≤1 کاپی ہے۔
LAMP کا رد عمل
| اجزاء | 25μL |
| 10×HC Bst V2 بفر | 2.5 μL |
| ایم جی ایس او4 (100mm) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM ہر ایک) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 سبز (25×)a | 1.0 μL |
| پرائمر مکسb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | 1 μL |
| سانچے | × μL |
| ddH₂O | 25 μL تک |
نوٹس:
1) ایکSYTOTM 16 Green (25×): تجرباتی ضروریات کے مطابق، دوسرے رنگوں کو متبادل کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔
2) ب۔پرائمر مکس: 20 µ M FIP، 20 µ M BIP، 2.5 µ M F3، 2.5 µ M B3، 5 µ M LF، 5 µ M LB اور دیگر جلدوں کو ملا کر حاصل کیا جاتا ہے۔
رد عمل اور حالت
1 × HC Bst V2 بفر، انکیوبیشن درجہ حرارت 60°C اور 65°C کے درمیان ہے۔
حرارت کو غیر فعال کرنا
80 ° C، 20 منٹ
