RT-LAMP کلر میٹرک ماسٹر مکس HCB5204A
اس پروڈکٹ میں ری ایکشن بفر، RT-Enzymes مکس (Bst DNA پولیمریز اور ہیٹ ریزسٹنٹ ریورس ٹرانسکرپٹیس)، لائو فلائزڈ پروٹیکٹینٹس اور کروموجینک ڈائی اجزاء شامل ہیں۔استعمال کرنے کے لیے، صرف بفر کا استعمال کریں، ری ایکشن انزائم اور پرائمر کو ملا کر ٹیمپلیٹ میں شامل کیا جاتا ہے۔lyophilized محافظ کا اضافہ براہ راست ہو سکتا ہے.یہ ایک لائو فلائزر سے منسلک تھا اور لائو فلائز کیا گیا تھا، اور استعمال ہونے پر صرف پرائمر اور ٹیمپلیٹس شامل کیے گئے تھے۔یہ کٹ ایمپلیفیکیشن کی تیز رفتار، واضح بصری شناخت فراہم کرتی ہے، جس میں منفی رد عمل سرخ رنگ میں ظاہر ہوتا ہے اور مثبت رد عمل پیلے رنگ میں تبدیلی سے ظاہر ہوتا ہے۔
جزو
| جزو | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| لوپ میڈیٹڈ ایمپلیفیکیشن بفر (رنگ کے ساتھ) | 0.96 ملی لیٹر | 4.80 ملی لیٹر × 2 | 9.60 ملی لیٹر × 10 |
| RT-Enzymes مکس | 270 μL | 2.70 ملی لیٹر | 2.70 ملی لیٹر × 10 |
| لائوفیلائزڈ محافظ | 0.96 ملی لیٹر × 2 | 9.60 ملی لیٹر × 2 | 9.60 ملی لیٹر × 20 |
درخواستیں
DNA یا RNA isothermal amplification کے لیے۔
ذخیرہ کرنے کی شرائط
خشک برف کے ساتھ نقل و حمل، -25~ -15℃ پر ذخیرہ کیا جاتا ہے۔بار بار منجمد پگھلنے سے بچیں، پروڈکٹ 12 ماہ کے لیے درست ہے۔
پروٹوکول
1.کمرے کے درجہ حرارت پر استعمال ہونے والے ردعمل بفر کو پگھلا دیں۔اچھی طرح سے مکس کرنے کے لیے کئی بار ٹیوبوں کو مختصر طور پر یا الٹائیں، پھر مائع کو ٹیوب کے نیچے تک جمع کرنے کے لیے سینٹری فیوج کریں۔
2.رد عمل کے نظام کی تیاری۔یہ ریجنٹ دو ری ایکشن سسٹمز میں تیار کیا جا سکتا ہے، مائع ری ایکشن مکس اور لائو فلائزڈ سسٹم مکس۔
1) مائع ردعمل مکس تیار کریں۔
| جزو | حجم |
| لوپ میڈیٹڈ ایمپلیفیکیشن بفر (رنگ کے ساتھ) | 10 μL |
| RT-Enzymes مکس | 2.8 μL |
| 10 × پرائمر مکسa | 5 μL |
| ٹیمپلیٹس DNA/RNA b | × μL |
| نیوکلیز سے پاک پانی | 50 μL تک |
2) Lyophilization نظام مرکب
① لائوفیلائزڈ مکس تیار کریں۔
| جزو | حجم |
| لوپ میڈیٹڈ ایمپلیفیکیشن بفر (رنگ کے ساتھ) | 10 μL |
| لائوفیلائزڈ محافظ | 20 μL |
| RT-Enzymes مکس | 2.8 μL |
| نیوکلیز سے پاک پانی | 50 μL تک |
② لائو فلائزیشن: تیار کردہ مکس کو 50μL سسٹم میں لائو فلائز کیا گیا تھا۔
③ ردعمل مکس تیار کریں۔
| جزو | حجم |
| لائوفیلائزڈ مکس | 1 ٹکڑا |
| 10 × پرائمر مکسa | 5 μL |
| ٹیمپلیٹس DNA/RNA b | × μL |
| نیوکلیز سے پاک پانی | 50 μL تک |
نوٹس:
1) ایک10×پرائمر مکس: 16 μM FIP/BIP، 2 μM F3/B3، 4 μM لوپ F/B؛
2) ب۔DEPC (پانی میں گھلنشیل) نیوکلک ایسڈ ٹیمپل کے لیے تجویز کی جاتی ہے۔
1.30-45 منٹ کے لیے 65 ° C پر انکیوبیٹ کریں، جسے رنگ کی تبدیلی کے رد عمل کے وقت کے مطابق مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے۔
2.ننگی آنکھ کے مطابق، پیلا مثبت تھا اور سرخ منفی تھا.
نوٹس
1.نمک بفر ٹیوب کے نچلے حصے میں نمودار ہو سکتا ہے، کمرے کے درجہ حرارت پر اچھی طرح مکس کرنے کے لیے مختصر طور پر بنور یا ٹیوبوں کو کئی بار الٹ دیں۔
2.رد عمل کا درجہ حرارت پرائمر کی حالت کے مطابق 62 ℃ اور 68 ℃ کے درمیان بہتر کیا جا سکتا ہے۔
3.پیکڈ ری ایجنٹس کو زیادہ دیر تک ہوا کے سامنے نہیں رکھا جانا چاہیے۔
4.سرخ اور پیلے رنگ کی رنگت کا رد عمل ری ایکشن سسٹم کی پی ایچ کی تبدیلی پر منحصر ہے، براہ کرم ٹرائس نیوکلک ایسڈ اسٹوریج سلوشن کا استعمال نہ کریں، جو ddH استعمال کرنے کی سفارش کی گئی ہے۔2اے ذخیرہ شدہ نیوکلک ایسڈ؛
5.تجربہ کو معیاری ہونا چاہیے، بشمول رد عمل کے نظام کی تیاری، لائو فلائزیشن، اور نمونے کی پروسیسنگ اور نمونہ شامل کرنے کا عمل؛
6.آلودگی سے بچنے کے لیے، رد عمل کے نظام کو الٹرا کلین بینچ میں تیار کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، دوسرے میں غلط مثبت مداخلت سے بچنے کے لیے کمرے کے فیوم ہڈ میں ٹیمپلیٹس شامل کریں۔
