5×Neoscript فاسٹ RT-qPCR پریمکس پلس-UNG

بلی نمبر: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) ایک انتہائی مستحکم ون ٹیوب پروب پر مبنی مکس ہے جو ون سٹیپ ریورس ٹرانسکرپشن اور مقداری PCR (qRT-PCR) کے لیے موزوں ہے۔یہ پرائمر اور تحقیقات کے پہلے سے مکسنگ کی حمایت کرتا ہے اور کم درجہ حرارت پر طویل عرصے تک ذخیرہ کرنے کے بعد مستحکم رہتا ہے۔ٹیسٹ کیے جانے والے نمونے کو استعمال کرتے وقت براہ راست شامل کیا جا سکتا ہے، بغیر اضافی ٹیوب کھولنے/پائپٹنگ آپریشن کے۔یہ پروڈکٹ اجزاء فراہم کرتا ہے، مثلاً ہاٹ اسٹارٹ ڈی این اے پولیمریز، ایم-ایم ایل وی، ہیٹ لیبل یوریسل ڈی این اے گلائکوسائلیز (TS-UNG)، RNase Inhibitor، MgCl₂، dNTPs (dTTP کی بجائے dUTP کے ساتھ)، اور سٹیبلائزرز۔جینیاتی طور پر تبدیل شدہ ریپڈ ایمپلیفیکیشن ریورس ٹرانسکرپٹیس اور ڈی این اے پولیمریز کے ساتھ، پی سی آر ایمپلیفیکیشن کو 20-40 منٹ کے اندر مکمل کرنا ممکن ہے۔یہ ریجنٹ اینٹی انحیبیٹری ایمپلیفیکیشن انزائم اور UNG انزائم کے مخلوط خامروں کے ساتھ qPCR کے لیے خصوصی بفر استعمال کرتا ہے۔لہذا، یہ ہدف کے جینوں کی اچھی پرورش حاصل کرسکتا ہے اور پی سی آر کی بقایا اور ایروسول آلودگی کی وجہ سے ہونے والی غلط پرورش کو روک سکتا ہے۔یہ ریجنٹ زیادہ تر فلوروسینس مقداری پی سی آر آلات کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے جیسے کہ اپلائیڈ بایو سسٹمز، ایپینڈورف، بائیو راڈ اور روشے مینوفیکچررز کے۔

جزو

1۔25×Neoscript فاسٹ RTase/UNG مکس

2.5×Neoscript فاسٹ RT پریمکس بفر (dUTP)

ذخیرہ کرنے کی شرائط

تمام اجزاء کو طویل مدتی اسٹوریج کے لیے -20℃ اور 3 ماہ تک 4℃ پر رکھا جانا چاہیے۔براہ کرم استعمال کرنے سے پہلے پگھلنے اور سینٹرفیوج کے بعد اچھی طرح مکس کریں۔بار بار جمنے سے گریز کریں۔

qRT-PCR ری ایکشن سسٹم کی تیاری

1) a. پرائمر کا حتمی ارتکاز عام طور پر 0.2μM ہوتا ہے۔بہتر نتائج کے لیے، پرائمر کی حراستی کو 0.2-1μM کی حد کے اندر بہتر بنایا جا سکتا ہے۔عام طور پر، تحقیقاتی ارتکاز کو 0.1-0.3μM کی حد کے اندر بہتر بنایا جا سکتا ہے۔

2) b. تیز رفتار پی سی آر طریقہ کار استعمال کرتے وقت، پرائمر اور پروبس کے ارتکاز کو بڑھانے کے نتیجے میں بہتر ایمپلیفیکیشن نتائج سامنے آسکتے ہیں، اور ان کے تناسب کو اسی کے مطابق بہتر کیا جانا چاہیے۔

3) مختلف قسم کے نمونوں میں مختلف اقسام اور انابیٹرز کا مواد اور ٹارگٹ جین کا کاپی نمبر ہوتا ہے۔نمونے کے حجم کو اصل حالت کے مطابق سمجھا جانا چاہئے۔اگر ضروری ہو تو نمونے کو نیوکلیز سے پاک پانی یا TE بفر سے کم کریں۔

رد عمل Cشرطیں

کوالٹی کنٹرول

1.فنکشن کا پتہ لگانا: کیو پی سی آر کی حساسیت، مخصوصیت اور تکرار کی صلاحیت۔

2.کوئی exogenous nuclease سرگرمی نہیں: exogenous endonuclease اور exonuclease آلودگی نہیں۔

نوٹس

1۔تیز رفتار ڈی این اے پولیمریز کی افزائش کی شرح 1kb/10s سے کم نہیں ہے۔مختلف پی سی آر آلات میں حرارتی اور کولنگ کی رفتار مختلف ہوتی ہے، درجہ حرارت کو کنٹرول کرنے کے طریقے اور تھرمل چالکتا، اور اس طرح آپ کے پرائمر/تحقیقات کے ارتکاز کو بہتر بنانا اور آپ کے مخصوص تیز پی سی آر آلے کے ساتھ مل کر چلانے کا طریقہ ضروری ہے۔

2.یہ پروڈکٹ وسیع قابل اطلاق کارکردگی کا مظاہرہ کرتی ہے، اور یہ اعلیٰ حساسیت کے مالیکیولر تشخیص کے لیے موزوں ہے۔کم اینیلنگ ٹمپریچر والے پرائمر کے لیے یا 200 bp سے زیادہ لمبے ٹکڑوں کو بڑھانے کے لیے تھری سٹیپ PCR طریقہ تجویز کیا جاتا ہے۔

3۔چونکہ مختلف amplicons میں dUTP کی مختلف استعمال کی کارکردگی اور UNG کے لیے مختلف حساسیت ہوتی ہے، اگر UNG سسٹم کا استعمال کرتے وقت پتہ لگانے کی حساسیت کم ہو جائے تو ری ایجنٹس کو بہتر بنایا جانا چاہیے۔اگر ضرورت ہو تو تکنیکی مدد کے لیے ہم سے رابطہ کریں۔

4.کیری اوور پی سی آر پروڈکٹس کے ایمپلیفیکیشن سے بچنے کے لیے، ایمپلیفیکیشن کے لیے مخصوص تجرباتی ایریا اور پائپیٹ کی ضرورت ہے۔دستانے کے ساتھ چلائیں اور بار بار تبدیل کریں اور پی سی آر ٹیوب کو ایمپلیفیکیشن کے بعد نہ کھولیں۔