Rnase inhibitor (Glycerol free)
Murine RNase inhibitor ایک recombinant murine RNase inhibitor ہے جس کا اظہار اور E.coli سے پاک کیا گیا ہے۔یہ RNase A, B یا C سے 1:1 کے تناسب سے نان کوولنٹ بانڈنگ کے ذریعے منسلک ہوتا ہے، اس طرح تینوں خامروں کی سرگرمی کو روکتا ہے اور RNA کو تنزلی سے بچاتا ہے۔تاہم، یہ Aspergillus سے RNase 1، RNase T1، S1 Nuclease، RNase H یا RNase کے خلاف موثر نہیں ہے۔Murine RNase inhibitor کا تجربہ RT-PCR، RT-qPCR اور IVT mRNA کے ذریعے کیا گیا تھا، اور یہ مختلف کمرشل ریورس ٹرانسکرپٹیز، DNA پولیمریز اور RNA پولیمریز کے ساتھ مطابقت رکھتا تھا۔
انسانی RNase inhibitors کے مقابلے میں، murine RNase inhibitor میں دو cysteines نہیں ہوتے ہیں جو آکسیکرن کے لیے انتہائی حساس ہوتے ہیں جو روکنے والے کے غیر فعال ہونے کا سبب بنتے ہیں۔جو اسے ڈی ٹی ٹی کی کم ارتکاز (1 ایم ایم سے کم) پر مستحکم بناتا ہے۔یہ خصوصیت اسے ایسے رد عمل میں استعمال کرنے کے لیے موزوں بناتی ہے جہاں DTT کی زیادہ ارتکاز رد عمل کے خلاف ہو (مثلاً ریئل ٹائم RT-PCR)۔
Aدرخواست
اس پروڈکٹ کو کسی بھی تجربے میں وسیع پیمانے پر استعمال کیا جا سکتا ہے جہاں RNA کے انحطاط سے بچنے کے لیے RNase کی مداخلت ممکن ہو، جیسے:
1. فرسٹ اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب، RT-PCR، RT-qPCR، وغیرہ؛
2. ان وٹرو ٹرانسکرپشن/ترجمے میں آر این اے کو انحطاط سے بچائیں (مثلاً وٹرو میں وائرل ریپلیکیشن)؛
3. RNA تنہائی اور صاف کرنے کے دوران RNase سرگرمی کی روک تھام۔
ذخیرہ کرنے کی شرائط
-25～-15℃ پر اسٹور؛
منجمد پگھلنے کے چکر ≤ 5 بار؛
1 سال کے لیے درست ہے۔
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ کو RNase Inhibitor کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے جو RNase A کے 5 ng کی سرگرمی کو 50% تک روکنے کے لیے درکار ہے۔
سالماتی وزن
RNase Inhibitor (Glycerol-free) ایک 50 kDa پروٹین ہے۔
کوالٹی کنٹرول
Exonuclease سرگرمی:
1 μg λ-Hind III ڈائجسٹ DNA کے ساتھ 16 گھنٹے 37°C پر انزائم کے 40 U کے انکیوبیشن کے نتیجے میں جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ طے شدہ ڈی این اے میں کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوا۔
Endonuclease سرگرمی:
1 μg λ DNA کے ساتھ 37 ° C پر 16 گھنٹے تک 40 U انزائم کے انکیوبیشن کے نتیجے میں جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ طے شدہ ڈی این اے میں کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوا۔
نکنگ سرگرمی:
1 μg pBR322 کے ساتھ 16 گھنٹے کے لیے 37℃ پر 40 U انزائم کے انکیوبیشن کے نتیجے میں جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے طے شدہ ڈی این اے میں کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوا۔
آر نیس سرگرمی:
37℃ پر 4 گھنٹے تک 1.6 μg MS2 RNA کے ساتھ 40 U انزائم کے انکیوبیشن کے نتیجے میں جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے طے شدہ RNA کی کوئی قابل شناخت انحطاط نہیں ہوئی۔
E.کولی ڈی این اے:
TaqMan qPCR کے ذریعے 40 U انزائم کا پتہ چلا ہے۔E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U ہے۔
Notes
1۔انزائم کو غیر فعال ہونے سے روکنے کے لیے مت ہلائیں اور نہ ہلائیں۔
2.RNase inhibitor 25℃ سے 55℃ کے درجہ حرارت پر فعال ہے اور ≥65℃ پر غیر فعال ہے۔
3. RNase H، RNase 1، اور RNase T1 کی سرگرمی کو روکا نہیں جاتا ہے۔
4. RNase سرگرمی کو روکنے کے لیے pH کی حد وسیع ہے (pH 5-9 پر فعال)، pH 7-8 پر زیادہ سے زیادہ سرگرمی کی نمائش کرتی ہے۔
