ایک قدم RT-qPCR SYBR گرین پریمکس
بلی نمبر: HCB5140A
ون سٹیپ RT-qPCR سائبر گرین پریمکس SYBR گرین I ڈائی کی بنیاد پر فلوروسینس کوانٹیفیکیشن کے لیے ہے۔جین کے لیے مخصوص پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے، ریورس ٹرانسکرپشن اور کیو پی سی آر کے رد عمل کو ایک ٹیوب میں مکمل کیا جاتا ہے، جس سے بار بار کیپ کھولنے اور پائپٹنگ آپریشنز کی ضرورت کو ختم کیا جاتا ہے، پرکھ کی کارکردگی میں بہت بہتری آتی ہے اور آلودگی کے خطرے کو کم کیا جاتا ہے۔آر این اے نمونوں کے لیے، کٹ میں موثر سی ڈی این اے ترکیب کے لیے گرمی سے بچنے والے ریورس ٹرانسکرپٹیز اور مقداری امپلیفیکیشن کے لیے ہاٹ اسٹارٹ ٹاک ڈی این اے پولیمریز کا استعمال کیا گیا ہے۔آپٹمائزڈ بفر سسٹم کے تحت، کٹ کی حساسیت انتہائی ظاہر کردہ اہداف کے لیے 0.1 pg تک اور اعتدال پسند اہداف کے لیے 1 pg تک زیادہ ہو سکتی ہے۔یہ کٹ ڈی این اے کے نمونوں کی پرورش اور مقدار درست کرنے کے لیے موزوں ہے۔یہ مختلف پودوں اور جانوروں کے نمونوں، خلیات اور مائکروجنزموں سے نیوکلک ایسڈز کی حساسیت کا پتہ لگانے اور مقدار درست کرنے کے قابل بناتا ہے۔
اجزاء
| No | نام | حجم | حجم |
| 1 | اعلی درجے کی بفر | 250 μL | 2×1.25 ملی لیٹر |
| 2 | اعلی درجے کی انزائم مکس | 20 μL | 200 μL |
| 3 | آر نیس فری ایچ2O | 250 μL | 2×1.25 ملی لیٹر |
ذخیرہ کرنے کی شرائط
اس پروڈکٹ کو 1 سال کے لیے روشنی سے دور -25~-15℃ پر اسٹور کیا جانا چاہیے۔
ہدایات
1. رد عمل کے نظام کی ترتیبd
| اجزاء | حجم (μL) | حجم (μL) | حتمی ارتکاز |
| اعلی درجے کی بفر | 12.5 | 25 | 1× |
| اعلی درجے کی انزائم مکس | 1 | 2 | - |
| فارورڈ پرائمر (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| ریورس پرائمر (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| آر این اے ٹیمپلیٹb | X | X | - |
| آر نیس فری ایچ2اےc | 25 تک | 50 تک | - |
نوٹس:
1) ایکٹیاس کا حتمی پرائمر ارتکاز 0.2 μmol/L تھا، جسے مناسب طور پر 0.1 اور 1μmol/L کے درمیان بھی ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
2) ب۔ریجنٹ انتہائی حساس ہے، 1pg-1μg کی رینج میں کل RNA کے ساتھ، اور انسانی نمونوں کی جانچ نے 1 pg-100 ng کا بہترین ان پٹ ظاہر کیا، جو کہ مناسب حد تک 15-30 کی حد میں مجموعی Ct قدر کو کنٹرول کرتا ہے۔
3) ج.20μL یا 50μL استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے تاکہ ٹارگٹ جین ایمپلیفیکیشن کی درستگی اور تولیدی صلاحیت کو یقینی بنایا جا سکے۔
4) ڈی۔براہ کرم الٹرا کلین بینچ میں تیار کریں اور نیوکلیز ریزیڈیو فری ٹپس اور ری ایکشن ٹیوب استعمال کریں۔فلٹر کارتوس کے ساتھ تجاویز کی سفارش کی جاتی ہے.کراس آلودگی اور ایروسول آلودگی سے بچیں۔
2.رد عمل کا پروگرام
| سائیکل مرحلہ | درجہ حرارت | وقت | سائیکل |
| ریورس ٹرانسکرپشن | 50℃a | 6 منٹ | 1 |
| ابتدائی ڈینیچریشن | 95℃ | 5 منٹ | 1 |
| ایمپلیفیکیشن رد عمل | 95℃ | 15 سیکنڈ | 40 |
| 60℃b | 30 سیکنڈ | ||
| پگھلنے کا منحنی مرحلہ | انسٹرومنٹ ڈیفالٹس | 1 | |
نوٹس:
1) ایکریورس ٹرانسکرپشن کا درجہ حرارت تجرباتی ضروریات کے مطابق 50-55 ° C کے درمیان منتخب کیا جا سکتا ہے۔ڈی این اے کے نمونوں کے لیے، ریورس ٹرانسکرپشن کے عمل کو چھوڑا جا سکتا ہے۔
2) ب۔خاص صورتوں میں اینیلنگ/توسیع درجہ حرارت کو پرائمر Tm قدر کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے، 60°C کی سفارش کی جاتی ہے۔
نوٹس
1. یہ پروڈکٹ صرف تحقیقی استعمال کے لیے ہے۔
2۔ براہ کرم اپنی حفاظت کے لیے لیب کوٹ اور ڈسپوزایبل دستانے کے ساتھ کام کریں۔
