Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG یا UDG) E.coli کا ایک ریکومبیننٹ کلون ہے جس کا مالیکیولر وزن 25 kDa ہے۔یہ uracil پر مشتمل واحد پھنسے ہوئے اور ڈبل پھنسے ہوئے DNA سے مفت uracil کی رہائی کو متحرک کرتا ہے، اور RNA کے خلاف غیر فعال ہے، اور PCR امپلیفیکیشن مصنوعات کی آلودگی کو روکنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔عمل کا اصول اس حقیقت پر مبنی ہے کہ اگر پی سی آر رد عمل میں ڈی یو ٹی پی کو ڈی ٹی ٹی پی کا متبادل بنایا جاتا ہے اور ڈی یو بیسز پر مشتمل ایک پی سی آر ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ تشکیل دیا جاتا ہے، تو انزائم منتخب طور پر یو بیسز کے گلائکوسیڈک بانڈ کو سنگل سٹرینڈڈ اور ڈبل سٹرینڈڈ میں توڑ سکتا ہے۔ ڈی این اے اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ کو ڈیگریڈ کرتے ہیں۔
تجویز کردہ درخواست
آلودگی کی روک تھام پروردن
اسٹوریج کی حالت
طویل مدتی اسٹوریج کے لیے -20 ° C، استعمال سے پہلے اچھی طرح مکس ہونا چاہیے، بار بار جمنے سے گریز کریں۔
اسٹوریج بفر
20 mM Tris-HCl (pH 8.0)، 150 mM NaCl، 1 mM EDTA، 1 mM DTT، سٹیبلائزر، 50% گلیسرول۔
یونٹ کی تعریف
37°C پر 1 گھنٹہ میں 1µg سنگل سٹرینڈڈ DNA پر مشتمل DU بیسز کو کم کرنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار 1 یونٹ ہے۔
کوالٹی کنٹرول
1.SDS-PAGE الیکٹروفوریٹک طہارت 98% سے زیادہ
2.ایمپلیفیکیشن حساسیت، بیچ ٹو بیچ کنٹرول، استحکام
3.UNG کے 1U کو 2 منٹ کے لیے 50℃ پر علاج کرنے کے بعد، 103 سے نیچے U پر مشتمل ٹیمپلیٹ کو مکمل طور پر گرا دیا جانا چاہیے اور کوئی امپلیفیکیشن پروڈکٹ تیار نہیں کیا جا سکتا۔
4.کوئی خارجی نیوکلیز سرگرمی نہیں ہے۔
ہدایات
| اجزاء | حجم (μL) | حتمی ارتکاز |
| 10 × PCR بفر (dNTP مفت، Mg²+مفت) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP، dGTP، dATP) | - | 200 μM |
| ڈی یو ٹی پی (ڈی ٹی ٹی پی کو تبدیل کریں) | - | 200-600 μM |
| 25 ایم ایم ایم جی سی ایل2 | 2-8 μL | 1-4 ایم ایم |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × پرائمر مکسa | 2 | 1× |
| سانچے | - | 1μg/رد عمل |
| ddH₂O | 50 تک | - |
نوٹ: a: اگر qPCR/qRT-PCR کے لیے استعمال کیا جائے تو، فلوروسینٹ پروب کو رد عمل کے نظام میں شامل کیا جانا چاہیے۔عام طور پر، 0.2 μM کا حتمی پرائمر ارتکاز اچھے نتائج دے سکتا ہے۔جب رد عمل کی کارکردگی خراب ہوتی ہے تو، پرائمر کی حراستی کو 0.2-1 μM کی حد میں ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔عام طور پر، تحقیقاتی ارتکاز کو 0.1-0.3 μM کی حد میں بہتر بنایا جاتا ہے۔پرائمر اور پروب کے بہترین امتزاج کو تلاش کرنے کے لیے ارتکاز کے تدریجی تجربات کیے جا سکتے ہیں۔
نوٹس
1.UNG انزائم کو PCR ایمپلیفیکیشن ری ایکشن سے پہلے ری ایکشن سسٹم سے آلودہ dUTP ایمپلیفیکیشن پروڈکٹس کو ہٹانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، پھر مصنوعات کی آلودگی کی وجہ سے غلط مثبت نتائج سے بچنے کے لیے۔
2.انسداد آلودگی PCR ردعمل میں استعمال کیے جانے والے UNG انزائم کے لیے زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت عام طور پر 2 منٹ کے لیے 50 ℃ ہے۔غیر فعال ہونے کی حالت 5 منٹ کے لیے 95℃ ہے۔
3.بار بار منجمد پگھلنے سے گریز کریں، اور درجہ حرارت کے بڑے اتار چڑھاو کا سامنا نہ کریں۔
4.مختلف جینز جن کو بڑھایا جانا ہے ان میں dUTP کی مختلف استعمال کی کارکردگی اور UNG انزائم کی حساسیت ہوتی ہے، لہذا، اگر UNG سسٹم کے استعمال سے پتہ لگانے کی حساسیت میں کمی واقع ہوتی ہے، تو رد عمل کے نظام کو ایڈجسٹ اور بہتر بنایا جانا چاہیے، اگر آپ کو تکنیکی مدد کی ضرورت ہو، تو براہ کرم رابطہ کریں۔ ہماری کمپنی.
