پروٹینیز K (مائع)
بلی نمبر: HC4502A
پروٹیناز K ایک مستحکم سیرین پروٹیز ہے جس میں وسیع سبسٹریٹ مخصوصیت ہے۔یہ ڈٹرجنٹ کی موجودگی میں بھی مقامی حالت میں بہت سے پروٹین کو خراب کر دیتا ہے۔کرسٹل اور مالیکیولر اسٹرکچر اسٹڈیز کے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ انزائم کا تعلق سبٹیلیسن فیملی سے ہے جس میں ایک فعال سائٹ کیٹلیٹک ٹرائیڈ (Asp39-اس کا69--.سر n224)۔کلیویج کی بنیادی جگہ پیپٹائڈ بانڈ ہے جو الیفاٹک اور آرومیٹک امینو ایسڈ کے کاربوکسائل گروپ سے ملحق ہے جس میں بلاک شدہ الفا امینو گروپس ہیں۔یہ عام طور پر اس کے وسیع کے لیے استعمال ہوتا ہے۔خاصیت
تفصیلات
| ظہور | بے رنگ سے ہلکا بھورا مائع |
| سرگرمی | ≥800 U/ml |
| پروٹین کا ارتکاز | ≥20 ملی گرام/ملی لیٹر |
| ڈی نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
| آر نیس | کوئی پتہ نہیں چلا |
ذخیرہ کرنے کی شرائط
2-8℃ کے درجہ حرارت پر اسٹور کریں۔
پراپرٹیز
| ای سی نمبر | 3.4.21.64 (آرTritirachium البم سے ecombinant) |
| سالماتی وزن | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| آئیسو الیکٹرک پوائنٹ | 7.81 |
| بہترین پی ایچ | 7.0-12.0 تصویر 1 |
| زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت | 65 ℃ تصویر 2 |
| پی ایچ استحکام | pH 4.5-12.5 (25℃, 16 h) تصویر 3 |
| تھرمل استحکام | 50℃ سے نیچے (pH 8.0، 30 منٹ) تصویر 4 |
| ایکٹیوٹرز | ایس ڈی ایس، یوریا |
| روکنے والے | ڈائیسوپروپل فلورو فاسفیٹ؛phenylmethylsulfonyl فلورائڈ |
درخواستیں
1. جینیاتی تشخیصی کٹ
2. آر این اے اور ڈی این اے نکالنے کی کٹس
3. بافتوں سے غیر پروٹین کے اجزاء کا اخراج، پروٹین کی نجاست کا انحطاط، جیسے ڈی این اے ویکسین اور ہیپرین کی تیاری
4. pulsed electrophoresis کے ذریعے کروموسوم DNA کی تیاری
5. مغربی دھبہ
6. وٹرو تشخیص میں انزیمیٹک گلائکوسلیٹڈ البومن ری ایجنٹس
احتیاطی تدابیر
استعمال کرتے وقت یا وزن کرتے وقت حفاظتی دستانے اور چشمیں پہنیں، اور استعمال کے بعد اچھی طرح ہوادار رکھیں۔یہ پروڈکٹ جلد کی الرجک ردعمل اور آنکھوں میں شدید جلن کا سبب بن سکتی ہے۔اگر سانس لیا جائے تو یہ الرجی یا دمہ کی علامات یا ڈسپنیا کا سبب بن سکتا ہے۔سانس کی جلن کا سبب بن سکتا ہے۔
پرکھ
یونٹ کی تعریف
ایک یونٹ (U) کو درج ذیل شرائط کے تحت 1 μmol ٹائروسین فی منٹ بنانے کے لیے کیسین کو ہائیڈولائز کرنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔
ری ایجنٹس کی تیاری
ریجنٹ I: 1 گرام دودھ کیسین کو 0.1M سوڈیم فاسفیٹ محلول (pH 8.0) کے 50ml میں تحلیل کیا گیا، 65-70 ℃ پانی میں 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، ہلایا اور تحلیل کیا گیا، پانی سے ٹھنڈا کیا گیا، سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے ذریعے pH8.0 میں ایڈجسٹ کیا گیا، اور درست کیا گیا۔ حجم 100 ملی لیٹر
ریجنٹ II: TCA محلول: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate، 0.3M acetic acid.
ریجنٹ III: 0.4M Na2CO3حل
ریجنٹ IV: فورینٹ ریجنٹ کو 5 بار خالص پانی سے ملایا جاتا ہے۔
ریجنٹ V: انزائم ڈیلوئنٹ: 0.1M سوڈیم فاسفیٹ محلول (pH 8.0)۔
ریجنٹ VI: ٹائروسین محلول: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ٹائروسین 0.2M HCl کے ساتھ تحلیل۔
طریقہ کار
1. ریجنٹ I کا 0.5 ملی لیٹر پہلے سے 37 ℃ پر گرم کیا جاتا ہے، 0.5 ملی لیٹر انزائم محلول شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں، اور 37 ℃ پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
2. رد عمل کو روکنے کے لیے 1 ملی لیٹر ریجنٹ II شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں، اور 30 منٹ تک انکیوبیشن جاری رکھیں۔
3. Centrifugate رد عمل کا حل.
4. 0.5 ملی لیٹر سپرناٹینٹ لیں، 2.5 ملی لیٹر ریجنٹ III، 0.5 ملی لیٹر ریجنٹ IV شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں اور 37 ℃ پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
5. او ڈی660OD کے طور پر طے کیا گیا تھا۔1;خالی کنٹرول گروپ: 0.5 ملی لیٹر ریجنٹ V کو OD کا تعین کرنے کے لیے انزائم حل کو تبدیل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔660OD کے طور پر2، ΔOD=OD1-OD2.
6. L-tyrosine معیاری وکر: 0.5mL مختلف ارتکاز L-tyrosine محلول، 2.5mL ریجنٹ III، 5mL سینٹری فیوج ٹیوب میں 0.5mL ریجنٹ IV، 37℃ میں 30 منٹ تک انکیوبیٹ کریں، OD کا پتہ لگائیں۔660L-tyrosine کے مختلف ارتکاز کے لیے، پھر معیاری وکر Y=kX+b حاصل کیا، جہاں Y L-tyrosine کا ارتکاز ہے، X OD ہے600.
حساب کتاب
2: رد عمل کے حل کا کل حجم (mL)
0.5: انزائم محلول کا حجم (mL)
0.5: کروموجینک تعیین (mL) میں استعمال ہونے والے رد عمل کا مائع حجم
10: رد عمل کا وقت (منٹ)
Df: dilution ایک سے زیادہ
C: انزائم کا ارتکاز (mg/mL)
حوالہ جات
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972)؛23:77۔
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.بائیوفیس۔Res.کمیون(1971)؛44:513۔
3. ہلز، ایچ.ET رحمہ اللہ تعالی.،یورجے بائیو کیم۔(1975)؛56:103–108۔
4. سمبروک جےet al. مالیکیولر کلوننگ: ایک لیبارٹری دستی، دوسرا ایڈیشن، کولڈ اسپرنگ ہاربر لیبارٹری پریس، کولڈ اسپرنگ ہاربر (1989)۔
اعداد و شمار
انجیر. 1 زیادہ سے زیادہ pH
100 ملی میٹر بفر حل: pH6.0-8.0، نا فاسفیٹ؛pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5، Glycine-NaOH. Enzyme ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 2 بہترین درجہ حرارت
20mM K-phosphate بفر pH 8.0 میں رد عمل۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 3 پی ایچ استحکام
50mM بفر حل کے ساتھ 25℃،16 h-علاج: pH 4.5-5.5، Acetate;پی ایچ 6.0-8.0، نا فاسفیٹ؛pH 8.0-9.0، Tris-ایچ سی ایلpH 9.0-12.5، Glycine-NaOH۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 4 تھرمل استحکام
50mM Tris-HCl بفر، pH 8.0 کے ساتھ 30 منٹ کا علاج۔انزائم کا ارتکاز: 1mg/mL
تصویر 5 اسٹوریج استحکامty at 25℃
