رنیس اے
Ribonuclease A(RNaseA) ایک واحد پھنسے ہوئے پولی پیپٹائڈ ہے جس میں تقریباً 13.7 kDa کے مالیکیولر وزن کے ساتھ 4 ڈسلفائیڈ بانڈ ہوتے ہیں۔RNase Ais ایک endoribonuclease ہے جو خاص طور پر C اور U کی باقیات پر سنگل پھنسے ہوئے RNA کو کم کرتا ہے۔خاص طور پر، کلیویج ایک نیوکلیوٹائڈ کے 5'-رائبوز اور ملحقہ پیریمائڈائن نیوکلیوٹائڈ کے 3'-رائبوز پر فاسفیٹ گروپ کے ذریعہ بننے والے فاسفوڈیسٹر بانڈ کو پہچانتا ہے، تاکہ 2,3'-سائکلک فاسفیٹس ہائیڈرولائزڈ ہو جائیں نیوکلیوسائیڈ فاسفیٹس (مثال کے طور پر pG-pG-pC-pA-pG کو RNase A کے ذریعے pG-pG-pCp اور A-PG پیدا کرنے کے لیے کلیو کیا جاتا ہے)۔RNase A واحد پھنسے ہوئے RNA کو صاف کرنے میں سب سے زیادہ فعال ہے۔تجویز کردہ کام کا ارتکاز 1- 100 μG/mL ہے، مختلف رد عمل کے نظام کے ساتھ ہم آہنگ۔کم نمک کا ارتکاز (0-100 mM NaCl) سنگل سٹرینڈڈ RNA، ڈبل پھنسے ہوئے RNA، اور RNA-DNA ہائبرڈائزیشن سے بننے والی RNA چینز کو کاٹنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
تاہم، زیادہ نمک کے ارتکاز (≥0.3 M) پر، RNase A صرف خاص طور پر سنگل پھنسے ہوئے RNA کو صاف کرتا ہے۔
RNase A کا استعمال عام طور پر پلاسمڈ DNA یا جینومک DNA کی تیاری کے دوران RNA کو ہٹانے کے لیے کیا جاتا ہے۔تیاری کے عمل کے دوران DNase فعال ہے یا نہیں، ردعمل کو آسانی سے متاثر کر سکتا ہے۔پانی کے غسل میں ابالنے کا روایتی طریقہ DNase کی سرگرمی کو غیر فعال کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔اس پروڈکٹ میں DNase اور پروٹیز شامل نہیں ہے، اور استعمال سے پہلے گرمی کے علاج کی ضرورت نہیں ہے۔اس کے علاوہ، اس پروڈکٹ کو مالیکیولر بائیولوجی کے تجربات میں بھی استعمال کیا جا سکتا ہے جیسے کہ RNase تحفظ تجزیہ اور RNA ترتیب تجزیہ۔
ذخیرہ کرنے کے حالات
مصنوعات کو -25℃~-15℃ پر 2 سال کے لیے ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
وضاحتیں
| ظہور | پاؤڈر |
| مقدار | 100mg/1g |
| مصنوعات کی قسم | آر نیس اے |
ہدایات
یہ RNase A سٹوریج حل تیار کرنے کے عام طریقوں میں سے ایک ہے۔اسے بھی تیار کیا جا سکتا ہے۔لیبارٹری میں روایتی طریقوں کے مطابق دوسرے طریقوں سے یا حوالہ ادب (جیسے10 mM Tris-HCl، pH 7.5 یا Tris-NaCl محلول میں براہ راست تحلیل)
1. RNase A سٹوریج سلوشن کے 10 mg/mL تیار کرنے کے لیے 10 mM سوڈیم ایسیٹیٹ (pH 5.2) استعمال کریں۔
2. 15 منٹ کے لیے 100 ℃ پر ہیٹنگ۔
3. کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کریں، 1 M Tris-HCl (pH 7.4) کا 1/10 والیوم شامل کریں، اس کے pH کو 7.4 پر ایڈجسٹ کریں (کے لیے)مثال کے طور پر، 10 mg/mL RNase اسٹوریج سلوشن 1 M Tris-HCl، pH7.4 کا 500 mL شامل کریں۔
4. منجمد اسٹوریج کے لیے -20℃ پر سب پیک کیا گیا، جو 2 سال تک مستحکم رہ سکتا ہے۔
[نوٹ]:
غیر جانبدار حالات میں RNaseA محلول کو ابالتے وقت، RNase ورن بنتی ہے۔اسے کم پی ایچ پر ابالیں، اور اگر بارش ہو تو اس کا مشاہدہ کیا جا سکتا ہے، جو کہ پروٹین کی نجاست کی موجودگی کی وجہ سے ہو سکتا ہے۔اگر ابلنے کے بعد تلچھٹ پائی جاتی ہے، تو تیز رفتار سینٹرفیوگریشن (13000rpm) کے ذریعے نجاست کو ہٹایا جا سکتا ہے، اور پھر منجمد کرنے کے لیے سب پیک کیا جا سکتا ہے۔
نوٹس
اپنی صحت اور حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے براہ کرم ضروری PPE، جیسا کہ لیب کوٹ اور دستانے پہنیں۔
