UDG/UNG انزائمز
UDG (uracil DNA glycosylase) ssDNA اور dsDNA میں uracil بیس اور شوگر فاسفیٹ ریڑھ کی ہڈی کے درمیان N-glycosidic لنک کے ہائیڈولیسس کو متحرک کر سکتا ہے۔یہ ایروسول آلودگی کو آسانی سے کنٹرول کر سکتا ہے اور عام مالیکیولر بائیولوجی سسٹم جیسے PCR، qPCR، RT-qPCR اور LAMP کے لیے موزوں ہے۔
وضاحتیں
| اظہار میزبان | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase جین |
| سالماتی وزن | 24. 8kDa |
| طہارت | ≥95% (SDS-PAGE) |
| حرارت کو غیر فعال کرنا | 95℃، 5~10 منٹ |
| یونٹ کی تعریف | ایک یونٹ (U) کی تعریف انزائم کی مقدار کے طور پر کی گئی ہے جو 25℃ پر 30 منٹ میں l μg dU پر مشتمل dsDNA کے ہائیڈولیسس کو متحرک کرنے کے لیے درکار ہے۔ |
ذخیرہ
مصنوعات کو دو سال کے لیے -25℃~-15°C پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
ہدایات
1.مندرجہ ذیل نظام کے مطابق پی سی آر ری ایکشن مکسچر کی تیاری
| اجزاء | حجم (μL) | حتمی ارتکاز |
| 10×PCR بفر (Mg²+ Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 ملی میٹر/لیچ) | 1 | 0.2 ملی میٹر/لیچ |
| ٹیمپلیٹ ڈی این اے | X | - |
| پرائمر1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| پرائمر 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA پولیمریز (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 تک | - |
نوٹ: تجرباتی تقاضوں کے مطابق، dUTP کی حتمی ارتکاز کو 0.2-0.6 mmol/L کے درمیان ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے، اور 0.2 mmol/L dTTP کو منتخب طور پر شامل کیا جا سکتا ہے۔
2.پرورش کا طریقہ کار
| سائیکل مرحلہ | درجہ حرارت | وقت | سائیکل |
| dU پر مشتمل ٹیمپلیٹ انحطاط | 25℃ | 10 منٹ | 1 |
| UDG ایکٹیویشن، ٹیمپلیٹ کی ابتدائی ڈینیچریشن | 95℃ | 5~10 منٹ | 1 |
| ڈینیچریشن | 95℃ | 10 سیکنڈ |
30-35 |
| اینیلنگ | 60℃ | 20 سیکنڈ | |
| توسیع | 72℃ | 30 سیکنڈ/kb | |
| حتمی توسیع | 72℃ | 5 منٹ | 1 |
نوٹ: 25 ° C پر ردعمل کا وقت تجرباتی ضروریات کے مطابق 5-10 منٹ کے اندر ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
نوٹس
1.UDG زیادہ تر PCR ردعمل بفرز میں فعال ہے۔
2.استعمال ہونے پر خامروں کو آئس باکس میں یا برف کے غسل میں ذخیرہ کیا جانا چاہیے، اور استعمال کے فوراً بعد -20°C پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
3.براہ کرم اپنی صحت اور حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے ضروری PPE، جیسا کہ لیب کوٹ اور دستانے پہنیں!
